基于β￣半乳糖苷酶为报告基因的耐辐射异常球菌启动-生物技术进展.PDF

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2019-03-02 发布于天津
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基于β￣半乳糖苷酶为报告基因的耐辐射异常球菌启动-生物技术进展.PDF

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基于β￣半乳糖苷酶为报告基因的耐辐射异常球菌启动-生物技术进展

生物技术进展２０１６年　第６卷　第４期　２６５~２７０研究论文ＣｕｒｒｅｎｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ＩＳＳＮ２０９５￣２３４１Ａｒｔｉｃｌｅｓ基于β￣半乳糖苷酶为报告基因的耐辐射异常球菌启动子检测载体构建李　杰ꎬ　张　陈ꎬ　张　维ꎬ　周正富∗ 中国农业科学院生物技术研究所ꎬ北京１０００８１摘　要: 耐辐射异常球菌是一种超强电离辐射抗性的微生物ꎬ其含有大量的胁迫反应相关蛋白及其转录调控因子ꎬ在适应环境变化和各种胁迫反应中发挥着重要作用ꎮ 为深入分析该菌的抗逆基因在不同胁迫下的功能ꎬ以β￣半乳糖苷酶为报告基因构建了耐辐射异常球菌启动子检测体系ꎮ 以耐辐射异常球菌基因组为模板扩增ｇｒｏＥＬ、ｈｓｐ２０、ｒｅｌＡ和ｒｅｌＱ启－动子片段ꎬ将其连接到到大肠杆菌耐辐射异常球菌穿梭载体ｐＲＡＤＺ１上ꎬ构建成具有启动子活性检测功能的重组质粒ｐＲＡＤＺ￣Ｐ、ｐＲＡＤＺ￣Ｐ、ｐＲＡＤＺ￣Ｐ和ｐＲＡＤＺ￣Ｐ ꎬ并将其转化至耐辐射异常球菌ꎬ测定β￣半乳糖苷酶酶活ꎮ 结果显ｇｒｏＥｈｓｐ２０ｒｅｌＡｒｅｌＱ示ꎬ这些启动子能在耐辐射异常球菌中启动Ｌａｃ￣Ｚ报告基因的表达ꎬ并受到胁迫条件的诱导调控ꎮ 耐辐射异常球菌启动子活性检测方法构建为该菌株特异性胁迫应答系统的研究提供了重要的实验基础ꎮ 关键词: β￣半乳糖苷酶ꎻ启动子活性检测ꎻ耐辐射异常球菌ꎻ穿梭质粒ｐＲＡＤＺ１ＤＯＩ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.２０９５￣２３４１.２０１６.０４.０８ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆＰｒｏｍｏｔｅｒＦｕｎｃｔｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓＶｅｃｔｏｒＵｓｉｎｇ β￣ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅＲｅｐｏｒｔＳｙｓｔｅｍｉｎＤｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓＬＩＪｉｅꎬＺＨＡＮＧＣｈｅｎꎬＺＨＡＮＧＷｅｉꎬＺＨＯＵＺｈｅｎｇ￣ｆｕ∗ ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅꎬＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓꎬＢｅｉｊｉｎｇ１０００８１ꎬＣｈｉｎａＡｂｓｔｒａｃｔ:Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓｉｓａｒｏｂｕｓｔｂａｃｔｅｒｉｕｍｗｈｉｃｈｓｈｏｗｓｅｘｔｒｅｍｅｉｏｎｉｚｉｎｇ￣ｒａｄｉａｔｉｏｎｔｏｌｅｒａｎｃｅ.ＡｂｕｎｄａｎｔｐｒｏｔｅｉｎｓａｎｄｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｆａｃｔｏｒｓａｒｅｉｍｐｏｒｔａｎｔｆｏｒｔｈｅｖａｒｉｏｕｓｓｔｒｅｓｓｒｅｓｐｏｎｓｅｉｎＤ. ｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ. Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｔｈｅｐｒｏｍｏｔｅｒｆｕｎｃｔｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｓｙｓｔｅｍｔｈａｔｕｓｅ β￣ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅｇｅｎｅａｓｒｅｐｏｒｔｇｅｎｅｉｎＤ. ｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓꎬｗｅｕｓｅｄｔｈｅｇｅｎｏｍｅｏｆＤ. ｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓａｓｔｅｍｐｌａｔｅｔｏａｍｐｌｉｆｉｃａｔｅｔｈｅｐｒｏｍｏｔｅｒｓｏｆｇｒｏＥＬꎬｈｓｐ２０ꎬｒｅｌＡａｎｄｒｅｌＱｂｙＰＣＲꎬｔｈｅｎｃｏｎｎｅｃｔｅｄｔｈｅｍｔｏＥ. ｃｏｌｉ￣Ｄ. ｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓｓｈｕｔｔｌｅｖｅｃｔｏｒｐＲＡＤＺ１ꎬｏｂｔａｉｎｅｄｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄｓｐＲＡＤＺ￣Ｐ ꎬｐＲＡＤＺ￣Ｐ ꎬｐＲＡＤＺ￣ＰａｎｄｐＲＡＤＺ￣Ｐ ꎬｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄａｎａｌｙｚｅｇｒｏＥＬｈｓｐ２０ｒｅｌＡｒｅｌＱｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｐｒｏｍｏｔｅｒ. Ｔｈｅｎｗｅｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ