兔移核重构胚再程序化相关基因片段的分离与鉴定.PDF

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! ! ’( ) ! *’ ) ! 年 月 #$$% ! !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 +,-.,/0 #$$% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 兔移核重构胚再程序化相关基因片段的分离与鉴定 郁卫东 李文雍 王玉阁 杨立新 刘桂生 杜 淼 陈清轩 （中国科学院遗传和发育生物学研究所 中国科学院研究生院，北京 !$$$7$ ） 摘 要 用单个植入前胚胎 差别显示方法（ C*D E=-?(6 F/6=G(,-H,H=’- ;I/0’-=@ C*D J=KK6/6-H=,( J=LG(,0 C6M6/L6 F’(06/,L6 C6,@H=’-， ），以家兔移核重构发育至 细胞、细胞时期的胚胎及囊胚作为起始材料。研究 EF;JJC51FNC # 7 家兔移核重构胚再程序化相关基因的表达。获得了 个与再程序化相关的基因片段，完成了对所有片段的克隆、 #8 序列分析，其中8 个反向*’/HA6/- 证实的片段在从O 到囊胚的发育阶段中呈现特异性表达的特点。这项研究为 ! 再程序化相关基因全长的分离以及功能研究奠定了良好的基础。 关键词 克隆，植入前胚胎，单个植入前胚胎C*D 差别显示，再程序化 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） 27! D !$$$1%$4! #$$% $!1$$%$1$8 哺乳动物已分化的成体细胞核或胚胎细胞核重 这些环节得到深入的理解，克隆技术才能从根本意 演正常精卵受精后配子核的程序化过程，无性繁殖 义上获得突破，才有可能广泛地运用到农业育种，生 下一代的过程就是克隆。核移植技术是克隆成功的 物医学等实践当中。 关键，核移植最终的目的是使移核重构胚获得启动 我们实验室在已有的实验基础之上建立了单个 卵裂和分化的能力。其中卵裂和分化的启动是通过 卵母细胞和植入前胚胎JJC51FNC 以及单胚胎构建 再程序化（ ）亦即基因活性结构的重建 文库的方法。单个植入前移核重构胚胎的 C6G/’?/,=-? @J*D 而获得的。首先，供体核的一切转录活动都停止，其 C*D 差别表达研究不仅可以对基因表达的时空模 次去核卵母细胞质中再程序化相关因子（蛋白质，核 式进行精确的定性和定量，而且可以对移核胚胎早 酸或其它诸如甾体类分子等因子）与染色体发生相 期卵裂和分化的多样性进行细致的研究，这为研究 ［，］ 互作用，共同完成对卵裂和分化的启动! # 。 克隆胚胎的再程序化过程奠定了良好的实验基础， 目前，克隆技术日臻完善，羊、牛、兔，猪、猴以及 是识别、分离和鉴定再程序化相关基因的有效技 ［ ］ 鼠等哺乳动物的体细胞克隆相继成功。但是克隆效 术7 P ## 。 率低和克隆动物发育存在缺陷是