放线菌素D所致V79靶细胞凋亡模型的建立-中国毒理学会.DOCVIP

放线菌素D所致V79细胞凋亡模型的建立 靳翠红，巫生文，刘秋芳，齐鸣，鲁帅，蔡原* (中国医科大学公共卫生学院毒理教研室, 辽宁，沈阳，110001， *通讯作者) 【摘要】 目的 用RNA合成抑制剂——放线菌素D(ActD)作用于V79细胞不同剂量和时间，筛选出最适作用浓度和时间以建立稳定的V79细胞凋亡模型。为后续研究旁观者效应提供实验基础资料。方法 不同剂量（0，0.25，0.5，1.0，2.0，4.0，8.0mg/L）ActD培养V79细胞不同时间（0.5，1，2，4h）。相差显微镜观察细胞形态学改变；MTT法测细胞存活率；AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡、坏死率水平，并确定最适ActD作用浓度和时间；染色体畸变分析检测染色体损伤；Hoechst33258染色，Annexin V-FITC/PI双染，荧光显微镜下观察凋亡情况；透射电子显微镜观察细胞超微结构的影响。结果 细胞形态学观察发现随ActD剂量增加变形细胞增多，细胞变圆、脱落，有发泡现象。在0.5~4mg/L之间，细胞存活率随着ActD剂量的增加而下降，存在明显的剂量-效应关系（P?0.05）。相同剂量下，随着时间的延长，细胞存活率也均有下降趋势，至4h时最低。细胞凋亡率则随剂量的增加而增加，在4mg/L时达到最高。同时，该剂量下作用1h细胞的凋亡率最高，之后逐渐降低；而4h时细胞坏死率最