生物技术综合实验.ppt

離子交換樹脂的前處理  離子交換樹脂使用前，先以蒸餾水除去其內之雜質 ，並以NaOH和HCl處理樹脂，使其上的官能基完全露出。 再以水清洗至pH 7.0，最後用欲使用的緩衝液浸泡。 * ppt课件 (1) 離子交換介質與蛋白質的結合量有一定限度，稱為該交換介質的 容量 (capacity)；若超過此一容量，多出的樣本會直接流出。 (2) 交換介質的結合容量大小，受層析條件不同、蛋白質種類不同、緩衝液不同、pH 或離子濃度不同等，有很大的差異。 如 DEAE-Sepharose CL-6B 每 100 mL 可結合 11 克白蛋白，但對 ferritin 只有 0.4 克。 介質容量有限 * ppt课件 可用 pH 或 盐 梯度 洗脱方式有： 连续梯度 (continuous gradient) 及 阶段梯度 (stepwise gradient)。 洗脱 * ppt课件 * ppt课件 * ppt课件 离子交换法操作要点 1胶体平衡：用过的胶体要再生完全平衡在缓冲液中； 2洗脱方式：通常都以氯化钠进行连续梯度洗脱； 3浓度体积：高低限洗脱液的浓度及体积 * ppt课件 离子交换层析的应用 制备、纯化生命物质 测定蛋白质等电点 * ppt课件 凝胶过滤层析 * ppt课件 凝胶的分类 1）葡聚糖凝胶 2）琼脂糖凝胶 3）聚丙烯酰胺凝胶 * ppt课件 凝胶过滤法的