敌百虫对N2a和SH-SY5Y细胞增殖与分化的抑制及其作用机理.DOCVIP

HYPERLINK \l _ToNTE的泛素化降解及ARA54的调节 龙鼎新 伍一军* * 通讯联系人，Email: wuyj@ioz.ac.cn （中国科学院动物研究所分子毒理学实验室，北京100101） 目的：通过检测神经病靶酯酶（NTE）是否通过泛素蛋白酶体途径降解，并研究ARA54对NTE的调节作用，以揭示NTE蛋白生理性降解的路径和相关的调节机制及ARA54的生理功能。 方法：应用泛素-蛋白酶体抑制剂作用于SH-SY5Y细胞和转染pNTE-GFP的COS7细胞，Western blot检测NTE蛋白水平；免疫共沉淀检测泛素与NTE的相互作用；比较泛素蛋白酶体途径和自噬溶酶体途径在NTE降解中的贡献；构建ARA54真核表达载体，与pNTE-GFP共转于COS7细胞，免疫共沉淀和荧光共定位分析确证ARA54与NTE相互作用；在Hela细胞中进行野生型或RING finger motif 突变体（C220S） HYPERLINK \l _ToARA54的过表达或RNAi技术敲减ARA54表达。 结果：（1）MG132既能阻止外源NTE在 COS7细胞中的表达，也能阻止SH-SY5Y细胞内源性NTE蛋白的降解，并且呈剂量-效应关系。当用蛋白质合成的抑制剂环己亚酰胺（CHX）作用后，SH-SY5Y细胞内NTE蛋白水平可降低43%，而加入MG