使用BioResolveRP色谱柱定量制剂缓冲液中的蛋白质-Waters.PDFVIP

[ 应用纪要 ] 使用BioResolve RP色谱柱定量制剂缓冲液中的蛋白质 Hua Yang和Stephan Koza 沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德) 应用优势 简介 ■ 可实现蛋白质与常用蛋白质辅料重组人血 蛋白质定量是蛋白质类药物成分和药物产品检测的基本要求，定量结果通常 清白蛋白(rHSA)的简单、快速分离 按280 nm处的紫外吸光度计算。但有时蛋白质制剂缓冲液中的组分会干扰 紫外吸光度测定结果。 ■ 蛋白质浓度测定时具有优异的线性且误差 较低 在本应用纪要中，我们使用BioResolve RP色谱柱在组氨酸缓冲液和重组人血 清白蛋白(rHSA)存在的条件下对利妥昔单抗(单克隆抗体)、白介素-12、促红 ■ 进样间样品残留低 细胞生成素以及阿巴西普(融合蛋白)进行反相LC分离和定量。BioResolve RP 色谱柱填料采用2.7 µm高柱效硅胶实心核颗粒，拥有经过优化的450Å孔径和 1,2 创新聚苯键合相，非常适用于蛋白的分离及相关应用 。 BioResolve RP色谱柱和mAb亚基标准品 沃特世解决方案 BioResolve™ RP色谱柱 ACQUITY™ UPLC™ H-Class Bio系统 关键词 蛋白质定量、制剂缓冲液、实心核颗粒、 反相、高通量、利妥昔单抗、白介素-12、 促红细胞生成素、阿巴西普、组氨酸、 重组人血清白蛋白(rHSA) 1 [ APPLICAT ION NOT E ] [ 应用纪要 ] 实验 样品描述 用26 mM组氨酸缓冲液(pH 6)将利妥昔单抗、白介素-12、促红细胞生成素和阿巴西普稀释为一系列具有不同浓度的溶液。然后 再向各样品中加入恒定浓度(1或2.5 mg/mL)的重组人血清白蛋白(rHSA)。 LC条件 高流速下白介素-12的梯度条件(图2)： 系统： ACQUITY UPLC H-Class Bio 流速 时间 (mL/min) %A %B 曲线 系统配置： 从自动进样器到色谱柱入口： 主动预加热器(APH)，MP35N， 0.000 1.8 65 35 12.5 (部件号：205000756) 0.083 1.8 65 35 6 从色谱柱出口到TUV ： 0.500 1.8 45 55 6 管路入口组件，0.0025 ID LT PEEK NUT， 0.650 1.8 10 90