肌醇唾液酸及岩藻糖代谢途径对嗜水气单胞菌致病性的-微生物学报.PDF

微生物学报 A cta Microbiologica Sinica 2018, 58(8): 1465-1474 /actamicrocn DOI: 10.13343/ki.wsxb Research Article 研究报告 肌醇、唾液酸及岩藻糖代谢途径对嗜水气单胞菌致病性的影响 李首纲，庞茂达，董雨豪，刘锦，杨媛媛，陆承平，刘永杰* 南京农业大学动物医学院，江苏 南京 210095 摘要：【目的】调查肌醇、唾液酸以及岩藻糖代谢途径在嗜水气单胞菌感染宿主过程中对细菌致病性的 影响。【方法】采用同源重组技术分别缺失嗜水气单胞菌 NJ-35 株的肌醇代谢相关基因 iolC、唾液酸代 谢相关基因 nanA 和岩藻糖代谢相关基因 fucK ，测定各缺失株对斑马鱼的半数致死量(LD50) ；将野生株 与缺失株共感染鲫鱼，统计野生株和缺失株在不同组织中的细菌载量。【结果】各代谢相关基因的缺失 均成功阻断了菌株对相应底物的降解能力。iolC 的缺失导致菌株对斑马鱼的 LD50 升高近 12 倍，而 nanA 和fucK 的缺失对 LD50 没有明显影响。野生株与 iolC 缺失株共感染鲫鱼，肝脏、脾脏和肾脏中野生株的 载量显著高于缺失株，表现出明显的生长优势；nanA 和fucK 缺失株与野生株共感染鲫鱼，野生株和缺 失株载量在各组织中均无明显差异。【结论】肌醇代谢途径在嗜水气单胞菌感染致病过程中发挥重要作 用，而唾液酸和岩藻糖代谢途径对细菌无明显影响。 关键词：嗜水气单胞菌，肌醇，唾液酸，岩藻糖，代谢，基因缺失，致病性 嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila )广泛分 毒力的关键因素。因此，嗜水气单胞菌致病机制 布于水环境中，可引起鱼类出血性败血症，也能 非常复杂，值得进一步研究。 导致其他哺乳动物甚至人类感染发病。大量研究 近年来，细菌代谢能力与其致病力之间的关 表明，该菌致病性与其产生的多种毒力因子如菌 系已引起广泛重视。在对弧菌( Vibrio) 、铜绿假单 体表面蛋白、胞外分泌因子及一些调控系统等有 胞菌(Pseudomonas aeruginosa)等的研究中发现， 关[1] 。然而，庞茂达等[2]研究发现，许多嗜水气单 细菌的代谢基因在细菌感染宿主的过程中与经典 胞菌流行菌株中并不含有已知的毒力因子如 III 型 的毒力因子同样重要[3–6] 。这些代谢途径的出现可 分泌系统和侧生鞭毛，部分强毒株中也不含有 VI 能有利于细菌在不同的生存环境中更加有效地获 型分泌系统，表明这些毒力因子并不是决定菌株 取营养。对猪链球菌(Streptococcus suis) 的研究发 基金项目：国家自然科学基金 ；江苏省农业科技自主创新项目[CX(17)2027] ；江苏省水产三新工程(D2017-3-1) *通信作者。E-mail ：liuyongjie@ 收稿日期：2017-10-10 ；修回日期：2017-12-18 ；网络出版日期：2018-01-12 1466 Shougang Li et al. | Acta Microbiologica Sinica , 2018, 58(8) 现，丝氨酸/苏氨酸激酶除了参与丝氨酸/苏氨酸的 1.3 试验动物 代谢，还是一种中枢调节因子，在细胞生长和分 80 日龄左右的 AB 系斑马鱼(Danio rerio)购 裂以及新陈代谢中起重要作用[7] 。本实验室前期研 自南京夫子庙宠物市场，体长 2–3 cm ，体质量 3 g 究发现，嗜水气单胞菌流行菌株 NJ-35 有 3 条分 左右。60 日龄左右的异育银鲫由江苏省水产养殖 别代谢肌醇、唾液酸和岩藻糖的途径，并且比较 技术推广中心提供，体长 10–12 cm，体质量 25 g 基因组学分析表明，这 3 条代谢途径只出现在强