绿色荧光蛋白在α-13半乳糖基转移酶敲除猪组织器官的表达分析-遗传.PDF

Hereditas (Beijing) 2015 年 12 月, 37(12): 1211 ―1217 研究报告 绿色荧光蛋白在α- 1,3 半乳糖基转移酶敲除猪组织器官 的表达分析 1,2 2 1,2 2 2 2 2 李智方 ，冯冲 ，纪慧丽 ，石宁宁 ，宋小凤 ，赵勤丽 ，龙川 ， 潘登科2 ，杨小淦1 1. 广西大学，亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，南宁 530004 ； 2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，农业部畜禽遗传资源与种质创新重点实验室，北京 100193 摘要:猪是人类异种器官移植的理想供体，然而猪-人的异种器官移植会产生剧烈的排斥反应。虽然已制备的 α- 1,3 半乳糖基转移酶基因敲除（Galactosyltransferase gene knockout, GTKO ）猪可有效缓解猪-人异种器官移植引 起的超急性免疫排斥，但缺少报告基因直观示踪移植后的细胞迁移及器官排斥状态。本文将 CAG 启动子驱动增 强型绿色荧光蛋白（Enhanced green fluorescent protein, EGFP ）的表达载体导入GTKO 猪耳成纤维细胞，通过体 细胞核移植技术制备了 EGFP 猪。利用双荧光蛋白观测镜、荧光显微镜及定量PCR 扩增观察、检测和分析克隆 猪各组织器官中EGFP 蛋白和转录本的表达状况。结果显示，EGFP 蛋白及转录本在克隆猪各组织器官中均有表 达，但在肝脏和中枢神经系统中表达较弱。本文成功获得了各组织器官表达EGFP 的GTKO 猪，为EGFP 示踪异 种细胞组织移植奠定了基础。 关键词: GTKO；增强型绿色荧光蛋白；猪；异种移植 Expression analysis of green fluorescent protein in tissues and organs in α-1,3 galactosyltransferase knockout pigs 1,2 2 1,2 2 2 2 Zhifang Li , Chong Feng , Huili Ji , Ningning Shi , Xiaofeng Song , Qinli Zhao , 2 2 1 Chuan Long , Dengke Pan , Xiaogan Yang 1. State Key Laboratory for Conservation and Utilization of Subtropical Agro -bioresources,Guangxi University, Nanning 530004,China; 2. Key Laboratory of Farm Animal Genetic Resource and Germplasm Innovation of Ministry of Agriculture, Institute of Animal Science, Chinese Academy of Agricultural Sciences,Beijing 100193, China Abstract: The pig is an ideal source to provide organs because its organ size and physiology are similar to humans. However, an acute rejection will ensue after pig-to-human xenotransplantation . The α- 1,3 galactosyltransferase gene knockout (GTKO) pigs were generated in recent years, and could solve the problem of hyperacute rejection . But due 收稿日期: 2015−04−15; 修