超声波辅助法提取芸豆种子黄酮类化合物的研究.docVIP

超声波辅助法提取芸豆种子黄酮类化合物研究 ? 摘 要：采用超声波辅助法提取芸豆种子黄酮类化合物。进行四因素三水平正交试验，用紫外-可见分光光度计测量各处理黄酮类化合物含量。通过极差分析，超声波辅助法提取芸豆种子黄酮类化合物的最佳条件为：乙醇体积分数为50%、提取温度为35℃ 关键词：超声波；芸豆种子；黄酮类化合物；提取 Study on the Extraction of Bioflavonoid Compound from Seeds of Kidney Beans by the Super-sonic Wave Auxiliary Method Abstract: This paper is to study the super-sonic wave auxiliary method to extract bioflavonoid from seeds of kidney beans. The test is designed to concern four factors and three levels and to use the spectrophotometer of both ultraviolet light and visible light for measuring the quantities of the relevant extracted bioflavonoid. From the range analysis , the best conditions for bioflavonoid extraction through super-sonic wave auxiliary method are the followings: ethanol volume percentage of 50%,extraction temperature of 35℃,extraction time length of 60 minutes, Key words: super-sonic wave; seeds of kidney beans; bioflavonoid; extraction 芸豆又名四季豆、棒豆、菜豆等，属于豆科菜豆属。无论是嫩荚还是种子都富含蛋白质、纤维素、 Ca、P、Fe等矿物质，具有丰富的营养价值，是世界上补充植物蛋白的重要蔬菜作物之。[1][2] 黄酮类化合物（Flavonoid）又称生物类黄酮（Bioflavonoid），是存在于自然界的一大类化合物。许多研究表明生物类黄酮具有多种生物活性[3]，具有抗菌、消炎、抗突变、降压、清热解毒、改善微循环、抗肿瘤等重要的保健功能，其抗氧化作用也早已被人们所重视。[4][5] 据李琼等报道，芸豆种子黄酮类化合物对清除超氧阴离子自由基（O2-）以及羟基自由基(·OH)有一定的效果，通过乙醇提取，芸豆种子黄酮类化合物含量达23.8μg/g。 [6]对于黄酮类化合物的提取工艺，据李琼报道，在其他条件相同的情况下，水浴法效果优于超声波法。[7]然而那是在乙醇浓度为60%、70%、80%，提取温度在65℃、75℃、85℃，提取时间为2h的情况下。会不会是由于在温度较高或者时间较长的情况下使用超声波提取破坏黄酮了结构呢？为了进一步探索超声波法提取芸豆种子黄酮类化合物的效果，特作本实验。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 原料：红芸豆（由六盘水职业技术学院芸豆课题组提供） 1.1.2 试剂：芦丁（rutin）标准品（比利时进口，北京化学试剂有限公司），无水乙醇，亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠等试剂均为市售国产分析纯。 1.1.3 仪器：紫外可见分光光度计（UV2450，日本岛津），超声波清洗器（KQ3200B型，工作频率40KHz，昆山市超声仪器有限公司），电子分析天平（AR2140，美国奥豪斯）、微型高速样品粉碎机（9101型，北京市检测仪器厂），电热恒温水浴锅（DZKW-4，二列八孔，上海科析试验仪器厂），电热鼓风干燥箱（DHG-9140A，上海一恒科技有限公司）。 1.2 方法 1.2.1 样品的制备 芸豆种子于电热鼓风干燥箱内65℃烘干、粉碎后过0.5mm筛，石油醚浸泡36h脱脂备用 1.2.2标准曲线和回归方程的建立 称取在120℃干燥至恒重的芦丁标准品10mg,用70﹪的乙醇溶液溶解并定容至100mL,使其浓度100μg/mL。将芦丁溶液用70﹪的乙醇稀释成0、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100μg/mL,各取1mL于试管中，加70﹪的乙醇1mL，加5% NaNO2溶液0.3mL，摇匀，静置6min,然后加10% Al(NO3)3溶液0.3mL,摇匀，静置6min,最后再加4% NaOH 溶液2mL,摇