迭代饱和突变提高卤醇脱卤酶HheAAM催化制备高校化学工程学报.PDF

第32 卷第5 期 高 校 化 学 工 程 学 报 No.5 Vol.32 2018 年10 月 Journal of Chemical Engineering of Chinese Universities Oct. 2018 文章编号：1003-9015(2018)05-1127-07 迭代饱和突变提高卤醇脱卤酶HheAAM 催化制备 6-氰基-3,5-二羟基己酸叔丁酯的酶活 王 露, 徐 刚, 杨立荣, 吴坚平 (浙江大学 化学工程与生物工程学院, 浙江 杭州 310027) 摘 要：(3R,5R)-6-氰基-3,5-二羟基己酸叔丁酯 (A7) 是合成降血脂药物阿托伐他汀钙的关键手性中间体，利用卤醇脱 卤酶催化(3R,5S)-6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯 (D3) 的脱卤氰化反应制备 A7 是很有潜力的合成方法。现有研究存在的 主要问题是卤醇脱卤酶种类少，对底物D3 的催化活性很低，且鲜见有关脱卤酶分子改造提高其对D3 催化活性的报道。 本研究利用基因挖掘技术获得了一个对 D3 表现出较高催化活力的卤醇脱卤酶 HheAAM (来源于 Agromyces mediolanus sp.)，运用定向进化和半理性设计方法确定了 4 个影响酶活的关键位点(84、88、136、144 位) ，然后使用迭代饱和突变 (ISM)策略对这 4 个位点进行组合突变，突变株 M4-HheAAM(84S-88L-136T-144C) 的比酶活为 0.89 U·mg1，是野生型 HheAAM(Wt-HheAAM) 的 13 倍，对 D3 的催化活性得到了显著的提高。 关键词：卤醇脱卤酶；脱卤氰化反应；酶活；迭代饱和突变；(3R,5R)-6-氰基-3,5-二羟基己酸叔丁酯 中图分类号：TQ465.92 文献标志码：A DOI ：10.3969/j.issn.1003-9015.2018.05.018 Enhancement of HheAAM Activity via Iterative Saturation Mutagenesis for tert-Butyl 6-Cyano-3,5-Dihydroxyhexanoate Synthesis WANG Lu, XU Gang, YANG Li-rong, WU Jian-ping (College of Chemical and Biological Engineering, Zhejiang University, Hangzhou 310027, China) Abstract: tert-butyl (3R,5R)-6-cyano-3,5-dihydroxyhexanoate (A7) is a key chiral synthon of the cholesterol- lowering drug atorvastatin. Application of halohydrin dehalogenases for dehalogenation and cyanogenation of tert-butyl (3R,5S)-6-chloro-3,5-dihydroxyhexanoate (D3) to prepare A7 is a promising approach. However, the main problems are lack of halohydrin dehalogenases, low catalytic a