商用快速检验法1目的利用已广泛应用於食品水质污染医药检验.DOC

商用快速檢驗法 1.目的 利用已廣泛應用於食品、水質污染、醫藥檢驗，含有酵素基質的培養基 Chromocult coliform agar 在短時間內檢驗出是含有大腸菌類，避免因實驗步驟繁瑣而影響檢驗數據。 2.原理 大腸桿菌以多管發酵法或濾膜法取得檢驗過程，有時會因瑣碎實驗步驟或不良水質特性影響其良策結果，進而影響時效性。 本實驗利用兩種特殊的培養基快速檢測大腸菌類，包誇酵素色性培養基Chromocult coliform agar 與 Mac Conkey agar，其中酵素色值性培養基之檢驗方法行政院環保署已公佈為標準方法。 Chromocult coliform agar 培養基中含兩種特殊的酵素基質，其中一種基質(salmon-gal)會與大腸菌類特有的半乳糖酵素(galactosidase) 反應使菌落生成紅色；另一種特殊基質(x-gluc) 則會與大腸菌類生成的葡萄糖酵素(glucuronidase)反應形成深藍色(或紫色)的菌落；至於其他腸內菌則因沒有這特殊的酵素，於此培養基中呈現白或無色菌落。以Chromocult coliform agar 培養基可抑制革蘭氏陽性菌生長，藉以分離革蘭氏性菌，並依乳糖發酵能力鑑別不同的腸道細菌。此培養基含有結晶紫與膽鹽，用於抑制革蘭氏陽性菌生長；培養基中所含的乳糖可測試腸道細菌是否具有發酵乳糖的能力，若能發酵乳糖而產生酸，則培養基中作為酸鹼指示劑的中性紅會轉為紅色，使得菌落表面呈現(粉)紅色，發酵乳糖的產酸量越多，菌落顏色越紅，菌落周圍培養基的膽鹽因酸沉澱後，也會呈現紅色。 3.實驗材料與方法 (1)器材:三角錐瓶、量筒、玻棒、定量玻璃吸管、、取藥勺、秤藥紙、培養皿、電磁加熱攪拌器 (2)方法 1.將水樣進行連續10倍稀釋至10ˉ5倍所以應有6個濃度，及原液10ˉ1至10ˉ5 倍。 2.培養基(Chromocult coliform agar) 配置為26.3g加入1000ml二段水，但培養皿僅需25ml/個，因此6個濃度6個培養皿僅需150m:換算所需量為： 26.3/1000=X/150。 3.培養基不能用濕熱滅菌。因此，要放置在電磁加熱攪拌器上，加熱並放入磁石攪拌至沸騰。因安全起見，.外圍放紙箱做阻隔。 4.沸騰的培養基待其冷卻，不能使其凝固。 5.將培養基分置6個培養皿內，並將6個濃度之菌液分別加入1mL，混合均勻後等待凝固。 6.培養基凝固後放入37° 7.換算原液每mL之菌數。 4.結果 數據整理: 每mL之大腸菌數 x 稀釋倍數 (1) 原液: 因為菌落的數量300個，所以無法計算 (2)10-1: 因為菌落的數量300個，所以無法計算 (2) 10-2: (297(個)/1(ml))* 10-2=2.97(個) (3) 10-3: (156(個)/1(ml))* 10-2=1.56(個) (4) 10-4: (97(個)/1(ml))* 10-4=0.97 (個) (5) 10-5: (31(個)/1(ml))* 10-5=0.00031(個) 5.討論 (1)是討論使用Chromocult coliform agar 培養基之原理、優缺點及適用性。 Chromocult coliform agar培養基中含有兩種特殊的酵素基質，其中一種基質（salmon-gal）會與大腸菌類特有的半乳糖苷酶（galactosidase）酵素反應使菌落生成紅色；另一種特殊基質（x-gluc）則會與大腸菌類生成的葡萄糖苷酶（glucuronidase）酵素反應形成深藍色（或紫色）的菌落；至於其它腸內菌則因沒有這些特殊的酵素，於此培養基中呈現白或無色菌落。 (2)解釋以Chromocult coliform agar培養基培養大腸菌之實驗結果，並說明你們這組培養基是否有其他非大腸菌的微生物。 沒有,但我們做出來得菌數都很多,其因可能是我們在取樣時,是取營樣豐富的水面 (3)比較多管發酵法、濾膜法及商用快速檢驗法檢驗大腸菌之優缺點，你覺得商用快速檢驗法在方法上是否比較簡易? 有比較簡易,商用快速檢驗法比多管發酵法時間節省了不少而比濾膜法少了好幾個步驟而且資源也應該少了許多,步驟也比較好記不意出錯 6.心得: 明哲: 本次實驗室商用快速檢驗法 是一種可以利用少量的時間 檢驗的快速方法,但是有些不熟悉實驗的步驟.所以導致前期溫度有些過高.作的時候不是很順手.但還好後面出來的成績很不錯喔~~ 信宏: 簡單又快速的商用檢驗法，這次有了濾膜法的基礎之後阿能更快將實驗作好了，因為這一樣也是在測試大腸桿菌的只是說做出來的菌顏色是粉紅色，我們使用的是崑山湖的水(很多藻類的地方)，有點小麻煩的是要等溫度降低才能夠到入不過有一二次可能做