谁是口水王-台大化学系.pdf

誰是口水王  版權所有，若需轉載請先徵得同意；疏漏之處，敬請指正。  臺大化學系普化教學組林妮嫺助教、佘瑞琳講師（2009.03.23 ）。 一、目的：利用簡易的碘試法（iodine test ），測定唾液澱粉酶（amylase ）催化澱 粉分解之活性，並探討影響酵素活性之因素。 二、實驗技能：學習操作定量液體分注器、刻度吸量管及點滴試驗（spot-test ）。 三、原理 ：唾液腺（salivary glands ）分泌出來的口水經由管道送到口腔中，它可 使我們的口腔保持濕潤、幫忙清潔口腔、潤滑食物使易於吞嚥，同時還具有 幫助消化的作用。這是因為唾液中含有一種消化酵素，澱粉酶，可以催化澱 粉的水解（hydrolysis ），成為小分子的寡糖（oligosaccharide ）或麥芽糖 （maltose ，雙醣）。酵素又稱為酶，在生物體內扮演非常重要的角色。酵素 催化反應的特定性（specificity ）及催化效率（efficiency ）高，它的本質是 具有特殊結構的蛋白質，由於酸鹼性及溫度會影響蛋白質的結構，因此酵素 催化反應的效率受環境的影響很大。本實驗以極為容易取得的唾液澱粉酶， 研究影響酵素催化反應效率的因素。 由於澱粉和三碘錯離子（I3 － ，褐色）會產生藍黑色錯合物，因此利用 碘試液與反應液混合，觀察顏色變化，即可判斷溶液中澱粉被唾液澱粉酶水 解的程度，記錄定量澱粉被完全分解所需的時間（即反應液與碘試液混合， 無藍黑色呈現），代表酵素催化反應之速率，分解所需的時間越短者表示酵 素的催化效率越高。 澱粉酵素 澱粉酵素 澱粉寡醣麥芽糖 與碘試液呈色：藍黑色 紅棕色 黃棕色 四、儀器與材料：量筒（10 mL）、漏斗、試管（10 支）、試管架、燒杯（100 mL）、 玻璃棒、刻度吸量管（2 mL ）、安全吸球、塑膠滴管（1 支）、乳帽及玻璃滴 管（2 支）、保利龍杯（2 ）、溫度計、計時器、投影片及襯墊白紙。 1 五、藥品：0.5%氯化鈉（sodium chloride, NaCl ）、碘試液（iodine solution, 1% I / 2 2% KI ）、2%澱粉溶液（starch ）、pH 5.0 、6.0 、7.0 、8.0 、9.0 緩衝溶液。 六、 實驗步驟 步驟 示範 （一）唾液澱粉酶活性預測定 配製唾液澱粉酶溶液： 經以漏斗及量筒收集並量取1 mL唾液並轉置 於乾淨的100 mL 燒杯中，加入25 mL 的0.5% 1 氯化鈉溶液，以玻璃棒攪拌並混合均勻。 使用溫度計測量溶液的溫度，此為室溫下反 應時之溫度。 碘試液： 以一支乾淨塑膠滴管吸取碘試液倒置於試管 2 架上備用，在「澱粉酶活性測定投影片」橫向 方格內，滴入 1 滴碘試液，預準備 5~10 滴碘 試液。 反應試液： 3 取1 mL 之pH 7.0 緩衝溶液與1 mL 的2%澱粉 溶液於乾淨試管中，此為pH = 7 的反應試液。 2 以2 mL 刻度吸量管量取2 mL 唾液澱粉酶溶 液，加入於上述反應試液中，立刻以彈震試管 方式或以乾淨之玻璃滴管吸排溶液數次，將溶 4 液混合均勻並開始計時。 註：刻度吸量管的使用法，參考實驗技能與示 範影片。 溶液混合後，立即以玻璃滴管取 1 滴反應試 液和投影片上 1 滴碘試液混合顯色。每隔30 秒，取 1 滴反