常用染色剂和配制.doc

常用染色剂及配制供组织学诊断用的优秀常规染色剂，不仅须使细胞核和细胞浆有选择性着染，也要使结缔组织着色。苏木素-伊红染色的切片适当分色，可使这些结构得以区分，胞核表现为蓝色，胞浆和结缔组织纤维呈各种色调的粉红，因此这是一种最常用的常规染色剂。?一、苏木素-伊红染色的基本原理?苏木素是最早用于生物学上的天然染色剂之一，百余年来，一直是生物学实验室最常用的组织学中细胞核的染料，它是从苏木树的树心中提炼出来的，为浅褐色结晶或淡黄褐色的粉末状物。易溶于乙醇、甘油，也可溶于热水。苏木素本身没有染色能力，它经过氧化后，能产生具有染色能力的苏木红，苏木红又称为氧化苏木素或苏木因。?苏木素变成苏木红的过程叫作“成熟”。成熟的方法一般有两种：一种是把配制好的苏木素液在开口瓶中放置两个月以上，让其在日光和空气中的氧的作用下使之氧化。故一般地盛苏木素的瓶子放在向阳处，时间愈长，染色的效果愈好。常配制一大瓶，备长期使用。另一种方法是在苏木素液中加入氧化剂，如磺酸钠，过锰酸钾，氧化汞，双氧水等。用这种方法成熟与用第一种方法者不同的是，它放置时间愈长，染色的效果愈低。这是因为苏木红被继续氧化可生成无色的化合物，故一次不宜配制过多，还应放置40C冰箱内避光保存以延长使用时间。它的优点是配制后即可使用。?成熟的苏木素对组织并无亲和力，须加入含金属离子的媒染剂，才能达到染色的目的。一般用于明矾苏木素的媒染剂为钾明矾或氨明矾。主要是利用明矾中的铝离子和苏木红结合形成的铝沉淀色素为紫蓝色，对染色质有很大的亲和力，水和酒精都不能使其褪色。用于铁苏木素的媒染剂是三价铁离子，苏木红的铁沉淀色素为黑蓝色，不溶于水，因此，故不能配制大量含媒染剂的混合液，一般用时现配，或在染色过程中，先用铁明矾媒染，然后再染苏木素，如磷钨酸苏木素染色即是。?常规苏木素染色的对比染色是用伊红，也有采用焰红，因为焰红比伊红色泽更鲜明，此外还有采用橘黄G，比布里希猩红，波尔多红等作为对比染色。?苏木素-伊红染色，在组织病理学中，是一种日常使用最为广泛的常规染色方法。一张优质的染色切片，可以清晰地观察到各种不同的组织结构以此作为病理诊断的确切依据。再根据此染色切片所见，分别进行不同的特殊染色。?二、染液的配制?在实验室内常用的苏木素染液有以下几种，不同的仅是染色时间以及比较每种染色方法彼此的优缺点，不过各有优劣。?（一）苏木素染液的配制方法如下?1.Harris氏苏木素液?甲液：苏木素 1g?无水酒精 10ml?乙液：硫酸铝钾 20g?蒸馏水 200ml?丙液：一氧化汞 0.5g?经典的配制方法是，先将甲液加热溶解后，密封待用，再将乙液加热溶解至沸，去火，待溶液仍处于小沸腾状态时再将甲液徐徐倾入其中，全部混合后，再使溶液在短时间内加热至沸腾，去火，最后，将氧化汞缓慢倾入溶液中（氧化汞一定要慢慢少量分次加入，切忌急躁。因氧化汞倒入后，溶液会迅速膨胀易沸出容器外而发生危险。）此时液体变为深紫色，待氧化汞全部放入后，再将溶液加温至沸腾片刻，立即将溶液放入流动的冷水中，并缓缓地连续摇晃至溶液完全冷却为止。隔夜后过滤，加入冰醋酸（按5%比例）混匀，再过滤后保存于冰箱内备用。?我们在实验工作中摸索了一种Harris氏苏木素的配制方法，染色效果很好，特介绍如下。?配方：（配制2000ml）?苏木素 9g?硫酸铝胺（铵明矾） 200g?氧化汞 7g（5—10g）?冰醋酸 100ml?蒸馏水 2000ml?器具：?3000毫升三角烧瓶 1个?200毫升量筒 1个?1000毫升量筒 1个?漏斗 1个（大）?滤纸 1大张?另备脱脂棉、电炉、湿抹布、大称量纸、流水槽等。?（器具要求达到化学洁净）?配法：?1．将苏木素溶于100毫升无水乙醇中，密封备用。?2．将200克铵明矾溶于2000毫升蒸馏水中，加热至沸。?3．去火。加入苏木素酒精搅拌，加热至沸。?4．去火。缓缓加入氧化汞。?5．微火煮至有金属膜产生。?6．去火。以湿抹布包住三角烧瓶的颈部。迅速放置于冷水浴中冷却，缓缓摇动烧瓶至液体完全冷却为止。?7．静置避光过夜。棉花过滤。滤液中加入冰醋酸（按5%的比例加入），混匀，滤纸过滤，备用。?注意事项：?1．配制好的苏木素液，未经使用的可长期置冰箱（冷藏）内保存。?2．盛液体的烧瓶要质优并且容积要大，防止忽速冷却对破裂和煮沸时液体溢出。?2.Hansen氏苏木素液?甲液：苏木素　　　　　　　　　　　1g?　　　无水酒精　　　　　　　　　　10ml?乙液：硫酸铝钾（钾明矾） 　　　　20g?　　　蒸馏水　　　　　　　　　　　200ml?丙液：高锰酸钾　　　　　　　　　　1g?　　　蒸馏水　　　　　　　　　　　16ml?　　先