间充质干细胞对系统性红斑狼疮病人B 细胞的作用-免疫学专业论文.docxVIP

贵阳 贵阳 医 学 院 2013 届 硕 士研 究 生论 文 - - PAGE 10 - 间充质干细胞对系统性红斑狼疮病人 B 细胞的作用 专业：免疫学 研究生：周婧 导师：左丽 教授 袁军 教授 摘 要 目 的 ： 研 究 正 常 人 骨 髓 来 源 的 间 充 质 干 细 胞 （ Mesenchymal stem cells, MSC）对系统性红斑狼疮（Systemic lupus erythematosus, SLE） 病人 B 细胞的免疫调节作用以及 SLE 血清对 MSC 调节作用的影 响。 方法：在添加胎牛血清（FBS）或 SLE 病人混合血清的细胞培养 液中，共培养正常人骨髓来源的 MSC 与正常人或 SLE 病人来源 的 B 细胞，检测 MSC 对 B 细胞的免疫调节作用，比较两种培养体 系对 MSC 的免疫调节功能的影响。用细胞增殖试验检测 B 细胞的 增殖情况；用流式细胞仪检测 B 细胞表面标志物，从而分析 B 细 胞的分化成熟状况；用 ELISA 方法检测 B 细胞分泌产生的 IgG, IgM 水平。 结果： 1.MSC 的培养与分化诱导 成功培养获得正常捐献者来源的 MSC，经 流式细胞仪检测，获得的 MSC 不表达 CD34,CD45 和 CD14，表达 CD44, CD73, CD90, CD105。经相应诱导，所获 MSC 可分化为成骨细胞和成 脂细胞。 2.MSC 能抑制 B 细胞增殖 MSC 可以抑制 LPS 诱导的正常人或 SLE 病人来源的 B 细胞的增殖；在 SLE 混合血清培养条件下，抑 制率高于 FBS 培养基中的抑制率，差异有统计学意义 (p0.05)。 3. MSC 对正常对照组和 SLE 病人 B 细胞成熟的作用 3.1 在 FBS 培养体系中，MSC 对 B 细胞表达的 CD19 无明显影响， 但 CD27 和 CD38 的表达均受到抑制。 3.2 在 SLE 混合血清培养下，MSC 对 CD19 的影响没有统计学意义, 而 CD27 和 CD38 的表达上升。 4. 对正常对照组和 SLE B 细胞免疫球蛋白分泌的影响 4.1 在 FBS 培养体系下，MSC 下调正常对照组 B 细胞分泌 IgG 和 IgM。 4.2 在 SLE 混合血清培养体系中，MSC 下调正常对照组 B 细胞分 泌 IgG 和 IgM。MSC 也能降低 SLE 组 B 细胞分泌 IgG，而 IgM 的 分泌未受明显影响。 结论： 1．MSC 能抑制 SLE 病人异常活化 B 细胞的增殖能力，抑制其成 熟，分化及抗体分泌功能。 2. SLE 病人血清中可能存在某些影响 MSC 免疫调节功能的因素。 关键词：自身免疫性疾病；系统性红斑狼疮；间充质干细胞； B 细胞 1. 前言 间充质干细胞（Mesenchymal stem cells ,MSC）是属于中胚层的一类多能 干细胞[1],可以从机体许多器官组织中培养获得（例如骨髓、脂肪组织[2]、脐 带血、胎盘、羊水等）。MSC 具有多向分化潜能，能分化为成骨细胞，脂肪 细胞，软骨细胞[3, 4]，肌原细胞[5], 神经前体细胞[6], 心肌细胞 [7] 以及一些其 他种类的细胞[8]。人类 MSC 表达中等水平的主要组织相容性复合物（MHC） Ⅰ类分子，不表达或仅表达低水平的Ⅱ类分子[9-11]。MSC 不表达共刺激分子 B7-1, B7-2, CD40, 和 CD40 配体。这些特征可能是 MSC 不会诱导同种异体 淋巴细胞增殖的原因[11-15]。 此外，MSC 的免疫调节功能也备受关注，它可 抑制 T 细胞增殖[16-20]，下调细胞毒性 T 细胞[21, 22]和 NK 细胞[23-26]，抑制树突 状细胞的成熟和抗原的提呈[25, 27-30]，干扰 B 细胞的增殖[20, 31-34]以及调节巨噬 细胞的功能[25, 35, 36]。因间充质干细胞来源广，易于体外扩增，具有免疫耐受 调节功能，成为目前的研究热点。 系统性红斑狼疮（Systemic lupus erythematosus, SLE）是一种以存在大量 自身反应性 B 淋巴细胞为特征的系统性自身免疫性疾病，病人体内存在多种 自身抗体，因此 B 细胞在 SLE 的发病机制中起着重要的作用[37-39]。有研究认 为 SLE 是一种干细胞病[40, 41], SLE 病人骨髓来源的 MSC 存在形态或功能异 常[41, 42] 。因此研究人员对 MSC 在 SLE 的治疗潜能方面展开了大量研究。 然而，许多关于利用 MSC 干预 SLE 的动物实验存在矛盾结论。正常 MSC 可 以抑制(NZB ⅹNZW)F1 狼疮小鼠 B 细胞的增殖，分化及活化[43]。然而，