如何高效制备生殖系传递的嵌合体小鼠.pdfVIP

第 32 卷第 10 期Vol.32, No.10 生 殖 与 避 孕 http://www.RandC.cn 2012 年 10 月Oct. 2012 Reproduction Contraception reproduction_journal@ ·综述· 如何高效制备生殖系传递的嵌合体小鼠 杨冠恒 施皖生 曾凡一 (上海市儿童医院, 上海交通大学附属儿童医院 医学遗传研究所, 上海, 200040) 【摘要】目前, 嵌合体技术已成为胚胎干细胞(ES 细胞)和诱导多能性干细胞(iPS 细胞)研究不可 或缺的一部分, 嵌合体小鼠模型主要用于基因功能、调控机制、致病机理等各方面的研究。要安 全可靠地进行ES 细胞和iPS 细胞的各种应用性研究, 首先需要验证细胞在体内向各种组织定向分 化的能力, 特别是生殖系传递的能力。而高效制备多能性干细胞生殖系传递的嵌合体小鼠, 需要 在分子水平、细胞水平、动物个体水平以及制备方法等各方面全面综合地分析考虑, 才能达到实 验设计的最优化。制备嵌合体小鼠主要有注射法和聚集法2 种方法, 各有利弊, 在整个制备过程 中, 需要考虑不同发育阶段以及不同小鼠品系胚胎的分化潜能、选用远交系和杂交系的胚胎作为 受体, 同时要考虑ES 细胞的遗传背景, 选择低代次的远交系和杂交系的ES 细胞或者iPS 细胞, 以 及优选KSR 培养体系。对于操作者，需根据实际情况, 全方位地综合考虑, 从而制定出合理的操 作方案。 关键词: 胚胎干细胞(ES 细胞); 嵌合体; 生殖系传递; 诱导性多能性干细胞(iPS 细胞) 中图分类号: R394.33 文献标识码: A 文章编号: 0253-357X(2012)10-0685-05 自1981年Evans 和Kaufman 首次成功地分离出 系传递的细胞系, 因此高效制备生殖系嵌合的嵌合 [1] 体小鼠对于高质量地研究ES细胞和iPS细胞显得尤 小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells, ES cells) 以来 , 目前已在人类、仓鼠、大鼠等物种都分离获得了 为重要, 整个过程涉及到分子水平、细胞水平、动 ES 细胞以及各种成体干细胞, 50 年前 Tarkowski 将 物水平, 这就需要我们全方位、多角度地分析制备 2 个 8- 细胞期胚胎通过聚合法制备出了第一只嵌合 过程中的各个环节, 达到实验设计的最优化, 并且尽 体小鼠[2], 目前嵌合体动物模型己经成为研究功能 可能地减少工作量, 缩短研究进程。在此我们就多 基因组学、发育生育学的一个可靠、快速、系统 能性干细胞水平、胚胎水平、制备方法等各方面 而全面的研究平台。用 ES 细胞和诱导多能性干细 分析考虑, 对如何高效制备生殖系嵌合体小鼠作如 胞(induced pluripotent stem cells, iPS cells)制备嵌合 下阐述。 体小鼠, 并不能完全产生生殖性传递嵌合体, 其嵌合 率从0% 到 100%不等, 而将ES 细胞和iPS 细胞进行 1 胚胎水平　　 基础性研究和应用性研究前, 需要获得具有高效生殖 胚胎发育各阶段由于存在分化潜能的差异, 在 本课题为国家“863 ”计划(2011AA020116) 、国家杰出青年 胚胎的不同发育阶段所制备的嵌合体小鼠的嵌合率 年科学基金、上海市重点学科建设项目(S30201)、 不尽相同。在胚胎 8- 细胞期, TT2 ES 细胞(来源于 国家“973 ”计划(2010CB945200) 、卫生部国家临床重 C57BL/6 ×CBA)无论用显微注射法[3], 还是聚集法 点专科建设项目 通讯作者