甲状腺激素T3对骨髓单个核细胞增殖及凋亡的影响-内科学(血液)专业论文.docxVIP

原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者： 多军 日期：讳年岁月≯≯Et 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑 州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者： 弓军 日期：叫d年j月≯耖Et 摘要甲状腺激素T3对骨髓单个核细胞增殖及凋亡的影响 摘要 甲状腺激素T3对骨髓单个核细胞增殖及凋亡的影响 研究生 马军 导师 孙玲 郑州大学第一附属医院血液科 郑州450052 摘要 目的： 探讨甲状腺激素T3对骨髓单个核细胞的增殖及凋亡的影响的调控及其可能 的分子机制。 Graves病(简称GD)是一种常见的自身免疫性疾病，是甲状腺机能亢进症的 最重要病因，临床表现并不仅局限于甲状腺，而是一种多系统的综合征，发病 机理尚未完全阐明。普遍的观点认为，Graves病是一种多因素共同作用导致的 疾病，除存在一定的遗传学基础外，环境因素(如感染、应激、碘等)和激素水 平都可能是激活或导致血中3，5，3’一三碘甲状腺原氨酸(T3)增高引起一系列临 床症状表现。[I]GD造成及多个器官脏器的损害，导致周围血象异常[2]，主要 表现为白细胞总数和粒细胞数目的减少[3．4]抗甲状腺药物是导致全血细胞减 少的重要原因，但[5]临床上约10％GD病人在治疗前就存在全血细胞减少[6]有 关GD合并全血细胞减少的机制尚不明了，有学者认支持免疫因素参与发病的观 点。如Weitzman等[7]发现，GD患者存在抗中性粒细胞的自身抗体。Douer等 [8]报道一例他巴唑所致GD合并粒细胞缺乏患者的血清可抑制骨髓造血祖细胞 的生长。国内李梅等[9，10]研究提示免疫因素在GD患者白细胞减少发病过程 中起重要作用。也有学者认为，GD合并白细胞减少与甲亢病情的严重程度有关， 摘要白细胞减少与甲亢病情成正比[11．12]本研究观察了甲状腺激素T3对正常人骨 摘要 白细胞减少与甲亢病情成正比[11．12]本研究观察了甲状腺激素T3对正常人骨 髓单个核细胞生长的影响，利用四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT)找出对细胞生 长影响最大的浓度和时段，并利用流式细胞仪检测细胞生长周期及凋亡的技术 印证这种影响。同时应用流式细胞仪检测细胞表面粒细胞集落刺激因子受体 (G—CSFR)的表达来观察这种影响是否通过这种途径实现。 方法： l MTT方法检测骨髓单个核细胞增殖活性 实验设甲状腺激素T3低浓度组(1p咖l、10pg／ml、100pg／m1)、T3高浓度组 (1x103p,g／ml、5x103lxg／ml、1x1041．tg／m1)、阴性对照组(含细胞的DMEM培养基) 及空白组(生理盐水)，将各组细胞及生理盐水接种于96孔板每组设5个复孔分 别培养24d,时，48小时，72小时，在不弃去培养基的情况下，每组每孔加入 20pL5mg／ml的MTT液，37*(2、5％C02胞和湿度的恒温孵箱中培养4h再将每组每 孔细胞离心上清液，每孔加入1501xL二甲基亚砜(DMSO)在酶标仪上；i贝1]490nm 波长处各孔的吸光度阳)值，并记录结果，找出T3抑制细胞的最适浓度和最适时 间。 2流式细胞仪测定T3对骨髓单个核细胞周期的影响及细胞凋亡率 实验分组实验设T3组(DMEM培养液配置单个细胞悬液中T3浓度为 5x103rtg／m1)，对照组(DMEM培养液配置单个细胞悬液中不含T3)，将2组细 胞放入37C、5％C02胞和湿度的恒温孵箱中培养48h后收集细胞按照 DNA．PrepTMReagentsⅪt说明书处理待测细胞后，立即在流式细胞仪(FACS Callibar)上检测，计数lxl04个细胞，用CELL Quest软件做DNA倍体分析，计 算细胞周期分布及细胞凋亡率。 3流式细胞仪检测T3作用于骨髓单个核细胞后细胞表面G．CSFR的表达。 实验设T3组(DMEM培养液配置单个细胞悬液中T3浓度为5x103吲m1)， 对照组(DMEM培养液配置单个细胞悬