间充质干细胞在前房相关免疫偏离中作用的研究-临床医学;眼科学专业论文.docxVIP

天津医科大学硕士学位论文中文摘要 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的 前房相关免疫偏离(anterior chamber-associated immune deviation，ACAD) 是指引入前房内的抗原所诱导出的一种免疫偏离反应，其特征是抗原特异性的 Thl免疫应答，如迟发型超敏反应和补体固定性抗体受到抑制，但却保留了非补 体固定性抗体，即IgGl亚型的产生。它是角膜特有的免疫赦免机制之一，是角 膜植片长期存活的主要因素；能够避免自身免疫性疾病和单疱病毒性基质型角 膜炎。间充质干细胞(messenchymal stem cells，MSCs)能够抑制多种免疫细胞(包 括T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞以及树突状细胞)的增殖和功能，具有免 疫调控和诱导免疫耐受的作用。本研究旨在通过小鼠前房相关免疫偏离动物模 型，观察MSCs在前房相关免疫偏离小鼠体内是否能够发挥免疫调控作用，以 及其可能的作用机制，为临床治疗角膜移植排斥反应和自身免疫性葡萄膜炎等 眼病提供理论依据。 方法 1、人脐带间充质干细胞(蝴SCs)的培养和扩增。 2、制作小鼠前房相关免疫偏离动物模型，C57BL／6小鼠随机分为4组，前房相 关免疫偏离组(A组)、前房相关免疫偏离+MSCs组(B组)，皮下免疫组(C 组)和皮下免疫+MSCs组(D组)，共4组。A、B两组将2m卵白蛋白(OVA， 50mg／m1)行前房注射，C、D组予2“l PBS前房注射，Bi D组前房注射同时给 予尾静脉注射1x106／0．2ml MSCs， 7d后4组均行足底皮下免疫OVAl001al (2．5mg／mlOVA与CFA等体积充分乳化)。 3、动物模型制作后14d用工程游标卡尺(精确度为0．01mm)测量4组小鼠双 耳廓厚度，然后于小鼠右耳廓皮内注射20 J．tLOVA溶液(20mg／mL)，左耳廓皮内 注射20I-tL无菌PBS溶液。2411后，再用工程游标卡尺测量4组小鼠双耳廓厚度， 按照下述公式计算耳廓肿胀数值。公式为：迟发型超敏反应耳廓肿胀数值=(24h 右耳廓厚度值一oh右耳廓厚度值)．(2411左耳廓厚度值．oh左耳廓厚度值)(1am)。 4、取造模后15d各组小鼠脾脏淋巴细胞孵育48h后的上清液，采用ELISA试剂 盒测定上清液中IL-10、TGF-B、IFN-7水平。 5、取造模后15d各组小鼠脾脏淋巴细胞，流式细胞仪测定CD4+CD25+Foxp3+、 CD8+Foxp3+调节性T细胞的百分比。 天津医科大学硕士学位论文 天津医科大学硕士学位论文 结果 1、蝴SCs生长良好，镜下观察细胞长梭形，呈排列紧密的漩涡样结构，培养近 5代后，细胞的形态没有发生明显变化，其增殖趋势也保持明显稳定。 2、成功建立小鼠前房相关免疫偏离动物模型。 3、迟发型超敏反应检测：A、B两组的小鼠耳廓肿胀程度远远小于C组 (P0．05)，证明ACAID造模成功。A、B两组耳廓肿胀程度无差别(胗0．05)，无 统计学意义，C、D两组耳廓肿胀程度无差别p0．05)。 4、ELISA结果：IL．10 B组较A、C、D组水平升高(氏0．05)，C与D组之间 无统计学意义；TGF-B B组比A、C、D组水平升高(氏0．05)，D组比C组水 平升高(氏0．05)；IFN-y B组较A、C、D组水平降低(氏0．05)，D组比C组水 平降低(尸0．05)。 5、流式细胞分析结果：B组脾细胞中CD4+CD25+Foxp3+T细胞在CD4+T细胞中 的比例和CD8+Foxp3+T细胞在CD8+T细胞中的比例均较A、C、D组升高 (氏O．05)，而C组和D组在这两方面均无统计学意义。 结论 MSCs通过调节1nhl／Th2细胞因子的分泌，以及激活或上调调节性T细胞来 发挥其免疫抑制作用。本研究证实MSCs可进一步抑制前房相关免疫偏离抗原 特异性DTH反应的发生，促进前房相关免疫偏离的免疫耐受状态的维持。从而 减小了机体针对抗原产生的免疫反应对眼球的破坏，为角膜移植术后排斥反应 及葡萄膜炎的治疗提供了理论依据。 关键词：间充质干细胞前房相关免疫偏离白介素．10 B．转化生长因子丫-干扰素 调节性T细胞 Ⅱ 天津医科大学硕士学位论文Abstr 天津医科大学硕士学位论文 Abstr act Objective Anterior chamber-associated immune deviation(ACAD)is a deviant immune response induced by antigen introduced into the AC，which is characterized by the antigen-specific suppression of classical Thl im