发酵液的预处理.pptVIP

* * 利用蛋白质的等电点——等电点时，蛋白质之间的静电排斥力最小，此时蛋白质质点迅速结合成聚集体，沉淀极易析出。 1．不同的蛋白质，具有不同的等电点。在生产过程中应根据分离要求，除去目的产物之外的杂蛋白；若目的产物也是蛋白质，且等电点较高时，可先除去低于等电点的杂蛋白，如细胞色素C的等电点为10．7，在细胞色素C的提取纯化过程中，调pH＝6．0除去酸性蛋白，调pH＝7．5～8．0，除去碱性蛋白。 　　2．同一种蛋白质在不同条件下，等电点不同。在盐溶液中，蛋白质若结合较多的阳离子，则等电点的pH值升高；因为结合阳离子后，正电荷相对增多，只有pH值升高才能达到等电点状态，如胰岛素在水溶液中的等电点为5．3，在含一定浓锌盐的水—丙酮溶液中的等电点为6；如果改变锌盐的浓度，等电点也会改变。蛋白质若结合较多的阴离子(如C1-、SO42-等)，则等电点移向较低的pH值，因为负电荷相对增多了，只有降低pH值才能达到等电点状态。 　　3．目的药物成分对pH值的要求。生产中应尽可能避免直接用强酸或强碱调节pH值，以免局部过酸或过碱，而引起目的药物成分蛋白或酶的变性。另外，调节pH值所用的酸或碱应与原溶液中的盐或即将加入的盐相适应，如溶液中含硫酸铵时，可用硫酸或氨水调pH值，如原溶液中含有氯化钠时，可用盐酸或氢氧化钠调pH值。总之，应以尽量不增加新物质为原则。 　　4．由于各种蛋白质在等电点时，仍存在一定的溶解度，使沉淀不完全，而多数蛋白质的等电点又都十分接近，因此当单独使用等点电沉淀法效果不理想时，可以考虑采用几种方法结合来实现沉淀分离。 河南金丹乳酸科技有限公司是国内最大的乳酸生产和出口创汇基地。 * 第二章 发酵液的预处理 * 乳酸的基本性质 乳酸(Lactic acid) ：α—羟基丙酸(2 —羟基丙酸；是一种天然存在的有机酸。 具有D—型和L—型两种构型；L —乳酸是哺乳动物体内正常代谢产物 ； 纯净的无水乳酸是白色的晶状固体, 熔点为16. 8 ℃,沸点为122 ℃(2Kpa) ,相对密度1. 249。乳酸与水可以完全互溶,不易结晶。 * “绿色材料与绿色奥运” 展览会上展示的衣服、瓶子、包装袋等。 日本开发的 PLAblock（聚乳酸布料） 。 * 脱杂质（杂蛋白、NH4+,SO42+） 水浴或离心 发酵过程 乳酸以乳酸钙的形式存在，加入浓硫酸后，生成CaSO4 沉淀释放出乳酸，尽量将盐沉淀出来。 浓缩后有大量盐分析出。 添加Ca2+盐或NH4+盐调节发酵液pH值 菌体沉淀（胞外产品） 酸化 （98%硫酸） 活性炭 浓缩 乳酸的粗分和预处理 * 为什么需要预处理？ 预处理过程 精制过程 固液分离目的：得到所需的目标粗产物 * 2.1发酵液的特点及预处理 发酵液的特点： 1、多为悬浮液，粘度大，不易过滤 2、滤液浑浊、滤速极慢（菌体自溶，核酸、蛋白 质及其他有机粘性物质） 3、目标产物在发酵液中的浓度通常较低； 4、含有高价无机离子（Ca2+ , Mg2+, Fe3+ ，成分复 杂（菌丝体、菌种代谢物和剩余培养基） 预处理是生化物质分离纯化过程中必不可少的首要步骤 2发酵液的预处理 * （1）发酵液杂质的去除：包括除去蛋白质、无机离子以及色素、热原质、毒性物质等有机物质。 （2）改善培养液的处理性能：主要通过降低发酵液的粘度，调节适宜的pH值和温度及絮凝与凝聚等操作来实现。 发酵液预处理的目的 根据发酵产品、所用菌种和发酵液特性来选择 * 发酵液杂质对分离提取影响最大的是： 高价无机离子和水溶性杂蛋白 高价无机离子——影响离子交换树脂对目标物的吸附 水溶性杂蛋白 影响离子交换和大网格树脂的吸附能力 有机溶剂提取和双水相萃取时，产生乳化，难以分离 在常规过滤或膜过滤时，使滤速下降，污染滤膜 * 钙离子的去除 ——加入草酸或草酸钠 镁离子的去除 ——加入三聚磷酸钠形成可溶性络合物 铁离子的去除 ——加入黄血盐形成普鲁士兰沉淀 2. 2 无机离子的去除 * 水溶性蛋白质的特征： 1、以胶体状态存在于发酵液中，其稳定性与所带电荷 有关； 2、两性物质，存在等电点，等电点多在酸性范围内。 3、加热易变性，可使溶液粘度降低，加快过滤速度 2. 3水溶性蛋白质的去除 根据蛋白质的特性，有几种去除方法？ * 1、盐析法 胶体体系；亲水胶体。 分子周围有水化层；水化层是胶体体系稳定的必要条件之一。 水溶性蛋白质的胶体特性 * 1、蛋白质的相对分子量和立体结构； 结构不对称的高相对分子量蛋白质易于盐析； 2、 离子半径小而带电荷较多的阴离子盐析效果比较好，含高价离子比低价型盐的效果好。 3、高离子强度下，升高温度，蛋白质溶解度降低4、pH值在接近蛋白质等电点时，有利于