催化水解反应的金属酶.pptVIP

第三节 酯酶 一、碱性磷酸酯酶 二、紫色酸性磷酸酯酶 三、磷酸双酯酶 四、核酸酶P1 第四节 其他金属水解酶 一、碳酸酐酶 二、亮氨酸氨肽酶 三、Na+、K+-ATP酶 四、金属水解酶模拟 酯酶催化各种酯键水解。其中，羧酸酯酶催化羧酸酯水解。 RCOO-R′ + H2O → RCOOH + R′OH 如脂肪酶、磷脂酶A。此外，磷酸酯酶则催化磷酸酯键水解。 RO—PO(OH)—OR′+ H2O → RO—PO(OH)2 + R′OH 磷酸酯酶又分为磷酸单酯酶(底物R = H)，如碱性磷酸酯酶，以及磷酸二酯酶，如磷脂酶C。 一、碱性磷酸酯酶 碱性磷酸酯酶(AP)是一种核酸酶,因为它在pH为8是活性最大而得名，它只催化磷酸酯的水解反应，而对磷酸二酯无催化作用。它的催化活性很高。 AP的结构 虽然不同的酶的结构有差异，但起反应活性中心都是一样的，含有一对Zn（Ⅱ）离子和一个Mg（ Ⅱ ）离子 反应过程 二、紫色酸性磷酸酯酶 紫色酸性磷酸酯酶（PAP）是含铁的糖蛋白，能够从植物和动物体内分离出来，在微酸性条件下，能催化水解磷酸酯，该类酶具双核铁中心活性部位，每个蛋白有两个铁原子，两个铁原子以Fe2+ Fe3+形式存在时，具有催化活性。 过程 磷酸双酯酶的这种双金属协同作用的催化机理也被用于解释催化DNA中磷酸双酯键水解的金属酶的作用机理。 需要强调的是，核酸酶活性中心双金属结构并不是普遍存在的。许多核酸酶，例如核糖核酸酶H、核酸内切酶EcoRI和葡萄糖链球菌核酸酶的活性中心都是单金属结构。而且，已有研究人员对一些基于Mg2+ 的核酸酶的双金属离子催化机理提出了质疑，因为这种机理几乎仅仅是建立在少数几种酶的晶体结构的基础之上。 四、核酸酶P1 核酸酶P1中含有三个Zn2+ 离子，下图是核酸酶P1的结构和金属离子的配位构型。 第四节 其他金属水解酶 一、碳酸酐酶 二、亮氨酸氨肽酶 三、 Na+、K+-ATP酶 四、金属水解酶模拟 二、亮氨酸氨肽酶 1.简介 亮氨酸氨肽酶是一种分布广泛的肽链端解酶，它催化肽链N-末端水解。 LAP是一种蛋白酶，LAP广泛分布于人体各组织，以肝、胆、肾、小肠以及子宫肌层内含量最多。 亮氨酸氨肽酶相对分子量为310 000，由6个相同的亚基构成。每个亚基由478个氨基酸残基组成，亚基的相对分子量为51 000，每个亚基都不含二硫键，有7个游离的—SH基，每个亚基都含有两个Zn2+。 三、Na+、K+-ATP酶 　　 依赖于钠、钾的三磷酸腺苷酶，简称Na+，K+-ATP 酶，广泛存在于各种动物的细胞质膜上，其功能是催化ATP水解，运送Na+ 和K+ 通过细胞质膜，在维持细胞的渗透性、低Na+ 高K+ 的细胞内环境和细胞的静息电位方面具有重要意义。 Na+，K+-ATP酶由α、β两种亚单位组成。有关α和β亚单位一、二、三级结构的资料很少，因为蛋白裂解后其疏水片段聚合在一起而造成测定的困难，氨基酸顺序分析进展缓慢。 α亚单位是催化亚单位，含有催化ATP水解的活性部位。β亚单位是糖蛋白，其确切功能尚不清楚。 2.辅助因子的特异性 　　 Na+，K+-ATP 酶的最主要特征是它的活性依赖于Na+ 和K+ 的存在。对Na+ 的需要是绝对的，而K+ 则可以被Cs+、Li+ 和NH4+ 等多种一价阳离子代替。在Na+/K+ 比值为5～10时，酶的活性最高。任何一种离子超出其最大激活浓度都有抑制作用，这可能与两种离子相互竞争酶的活性部位有关。酶与底物结合还需要Mg2+ 存在。 3.催还机理 　 　Na+，K+-ATP酶的基本功能是催化ATP末端磷酸水解，进行Na+、K+ 的主动运送，以维持细胞内Na+、K+ 浓度相对稳定，保持细胞膜内外渗透压平衡 　　 ATP水解是一个多步骤的连续反应。 四、金属水解酶模拟 底物的代替 活性中心 (2) 设计杂化金属水解酶模拟物，即将具有催化功能的金属配合物与主体分子(如蛋白质、DNA、抗体、环糊精和杯芳烃等)进行有机/无机杂化得到的催化剂, 提供特定的第二配位环境，构建反应的预组织结构而诱导反应的区域/立体选择性，从而提高模拟酶的活性； (3) 构建完整的多金属酶仿生催化系统，通过超分子和生物技术，将多个相关金属酶模拟物组合到一起，从而实现对底物的完全催化。 由于时间、精力、可参考资料有限，更重要的是我们学识浅薄，所以不当与错误之处在所难免，恳请刘院长批评指正！ 在金属水解酶模拟研究过程中，化学家们通常选用一