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第一章材料和方法
三羟甲基氨基甲烷(Tris) 武汉博士德生物工程有限公司
纯乙酸 武汉博士德生物工程有限公司
二甲苯 武汉博士德生物工程有限公司
2，3，5一三苯基氯化三苯基四氮唑(TTC) 美国Sigma公司
多聚甲醛 江苏碧云天生物试剂有限公司
菱盔丞=钽红(HE)牲液 江苏碧云天生物试剂有限公司
硅胶 泉州融盛化工有限公司生产
磷酸盐缓冲液(PBS)干粉 江苏碧云天生物试剂有限公司
水合氯醛 江苏碧云天生物试剂有限公司
30％H202 武汉博士德生物工程有限公司
中性树胶 武汉博士德生物工程有限公司
无水乙醇 武汉博士德生物工程有限公司
DAB显色试剂盒 武汉博士德生物工程有限公司
TUNEL检测试剂盒 武汉博士德生物工程有限公司
双蒸水(DDH。0) 青岛大学医学院附属医院
BMP一7 北京奥博森生物技术有限公司
1．4配制溶液
(1)配制PBS溶液：
PBS干粉 l袋
DDH20 至2000ml
搅拌器搅拌溶质至完全溶解，在126℃、1．5KPa的条件下高压蒸汽灭菌20min，
置于4℃冰箱内保存备用。
(2)配制多聚甲醛：
多聚甲醛 40．Og
DEPC lml
PBS缓冲液 至总体积1000ml
将溶液按上述比例配好后， 持续加热搅拌至60一．-．65C，使甲醛完全溶解。冷却
后4℃保存备用。
(3)配制TTC：
TTC 0．59
PBS缓冲液 50ml
3
(4)配制TBS溶液：
Tris 1．29
纯乙酸 0．45ml
氯化钠 8．59
DDH20 至总体积1000ml
1．5实验方法
1．5。1制备线栓
将直径0．26衄的鱼线截成约50-60衄长的线段。尽量剪成平头，在距球形端
18．5mm处用记号笔作一标记，用细砂纸在距球端3mm处打磨，置于75％乙醇消毒后
经125mg／dl肝素浸泡2h，60C烘干备用。
1．5．2制备脑缺血模型
腹腔麻醉后将大鼠固定于手术台上，仰卧位，备皮消毒，沿颈部正中线切开皮肤，
逐层分离结缔组织、肌肉组织，钝性分离左侧颈总、颈外及颈内动脉(CCA、ECA、
ICA)，将颈外动脉远端用4-0手术线结扎，将颈总动及颈内动脉采用动脉夹暂时予
以夹闭，在颈外动脉结扎线的近端
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