解脲脲原体与淋球菌耐药表型及基因型的流行病学研究-流行病与卫生统计学专业论文.docxVIP

中文摘要题目：解脲脲原体与淋球菌的耐药表型及基因型的流行病学研究 中文摘要 题目：解脲脲原体与淋球菌的耐药表型及基因型的流行病学研究 研究生姓名：徐金水 导师姓名：王蓓副教授 毕业学校：东南大学 耳的t(1)调查江苏省局部地区解脲脲原体的耐药状况并提出用药建议；(2)研究江苏省局部地区解脲 脲原体的耐药机制(包括对四环素类、氟喹诺酮类和大环内酯类药物)；(3)根据解脲脲原体两个不同基 因型的基因组差别建立和评价新的基因分型方法．并进行初步的临床应用；(4)研究江苏省淋球菌对氟 喹诺酮类药物的耐药机制。 研究方法：(1)用法国梅里埃支原体鉴定试剂盒进行解脲脲原体(Uu)与人型支原体(^他)的初步分 离和鉴定，并对解脲脲原体培养阳性物进一步经过滤培养和特异性PeR试验进行确认．(2)应用微量肉 汤稀释法检测八种抗生索(四环紊，米诺环素、红霉素、克拉霉素、阿齐霉素、环丙沙星、氧氟沙星和 左旋氧氟沙星)对确认的84株解脲脲原体的最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration，MIC)． (3)按药敏结果分层，从s4株解臊朦原体菌株中随机抽取34株，用PCR扩增四环素耐药基因tetM； 随机抽取28株。采用PCR扩增氟喹诺酮耐药基因gyrA的氟喹诺酮酎药决定区(QRDR)，并对扩增产 物进行测序分析，采用Blast比对法比较临床菌株序列与标准菌株序列的差异。(4)基于解脲脲原体14 个血清型的23S rRNA基因序列的差异，采用primerpremier5．0软件设计PCR引物和选取限制性内切酶， 自行建立解脲脲原体的基因分型方法，通过与标准菌株和“金标准”鉴定的临床菌株比较，对其进行评 价并初步应用于临床菌株进行基因分型和分析。(5)根据淋球菌药敏结果，从已经鉴定为淋球菌的95 株菌株中。分层随机抽取54株，采用PCR扩增氟喹诺酮耐药基因∥耐和脚心的QRDR，并进行DNA 铡序，分析其突变位点与药敏结果MIC的相关关系。(6)结合实验结果和流行病学调查资料，采用卡方 检验、方差分析、秩和检验和精确概率法对数据进行统计分析． 研究结果：(1)解脲脲原体对米诺环素、四环桑、克拉霉素、阿齐霉素、红霉素、环丙沙星、氧氟沙星 耜左旋氧氟沙星的MICso(50％的菌株被抑制的浓度)分别为0．0625、《0．125、02,5、1、2、8、4和2mg／L, MICro(90％的菌株被抑制的浓度)分别为0．125，1、1、4、8，64、16和8mg／L．(2)大环内酯类抗生 素(克拉霉素、阿齐霉素和红霉素)的耐药水平(包括MIC几何均数和耐药率)在有Mh合并感染组与 无Mh合并感染组间有统计学差异(P．日D．05)，伴随Mh感染的解腮屎原体对大环内醣类抗生素的MIC 水平和耐药率都较高．(3)在34株非四环素耐药的解脲腺原体菌株中，有7株检测到term基因．term 基因阳性组的四环素和米诺环素的MIC水平都比tam阴性组高。且有统计学意义(四环紊：t--4．34， P=0．000l；米诺环紊：f=．5．90，P0．0001)。在28株解脲脲原体菌株中，经测序分析发现gyrA基因出 现三种突变形式：①302位碱基C—T的突变，导致101位(相当于大肠杆菌84位)丙氨酸改变为缬氨 酸；②336位碱基c—A的突变，导致112位(相当于大肠杆菌95位)天冬氨酸改变为谷氨酸i@267 位碱基T的缺失。发生gyrA基因突变的主要是耐药菌株和中度敏感菌株，在敏感菌株没有发现gyrA基 因突变；所有有基因改变的菌株其氟喹诺酮类药物的M／C水平踢显高于没有突变的菌株组。(4)在标准 菌株中，PCR-RFLP(PCR为基础的限制性酶切多态性分析)方法分型能力为100％，同时分型结果有较 好的特异性和可重复性，电泳图谱清晰易于分辨和解释。在通过“金标准”鉴定的临床菌株中，该分型 方法的灵敏度为97％，特异度为89％，重复试验一致率为98％。PeR阳性扩增模板两次独立分型实验的 一致率为90．62％t PCR-RFLP分型结果与测序分型结果的一致率为100％。(5)有生殖道感染病史和合 并Mh感染的解脲脲原体基因型主要表现为生物1型，而合并霉菌感染的解脲脲原体主要为混合型。不 同型剐的解脲朦原体对四环素类、大环内酯类和氟喹诺酮类药物的敏感性存在统计学差异，其MIc的平 均水平均表现为T960型高于生物l型。解脲脲原体基因型与氟喹诺酮类药物耐药相关的gyrA基因的氨 基酸改变有较强的相关性，出现氨基酸Asp95Glu改变的菌株均属于T960型，而无此改变的菌株均不属 于1r960型。(6)分离的95株淋球菌对环丙沙星100％的耐药；通过测序分析，在54株淋球菌中检测到 g),rA和脚心的18种突变形式．环丙沙星的MIC水平在不同p甜