芥菜型油菜种皮颜色的分子生物学分析-作物遗传育种专业论文.docxVIP

芥菜型油菜种皮颜色的分子生物学研究摘要：与黑籽油菜相比，黄籽油菜以其种皮薄，纤维素、木质素含量低，蛋白质 芥菜型油菜种皮颜色的分子生物学研究 摘要：与黑籽油菜相比，黄籽油菜以其种皮薄，纤维素、木质素含量低，蛋白质 含量高，含油量高，油清澈透明及其饲用价值高等优点而受到油菜育种家的关注。 芥菜型油菜种皮颜色遗传比较简单，黄籽对棕籽差别明显。为了弄清油菜黄籽的 遗传规律和黄籽形成的分子基础，本研究以四川黄籽自交系和紫叶芥自交系及其 杂种后代为材料，对芥菜型油菜种皮颜色和叶片颜色的遗传进行了研究；对控制 棕色种皮的基因进行了RAPD标记；参照在拟南芥4-二氢黄酮还原酶基因序列， 设计基因专一引物，靶向扩增克隆目的基因片段。 通过本研究，耿得了以下的结果： l芥菜型油菜种皮颜色、叶片颜色的遗传分析表明，棕色种皮对黄色种皮为 显性，Bcl和F2代植株上种子种皮颜色出现分离，分离比分别为棕：黄为3：1 和棕：黄为15：1，说明种皮颜色是由2对独立遗传基因控制的；叶片颜色是由一 对基因控制的，紫色对绿色为显性。人工气候箱中的39株四川黄籽×(紫叶芥× 四川黄籽)Bct代叶色和种皮颜色分离情况研究表明：叶色基因和种皮颜色基因间 的重组率为46．2％，初步判定芥菜型油菜种皮颜色基因和叶子颜色基因是独立遗传 的。 2培育1个位点显性、另一位点纯合隐性的棕耔近等基因系，己回交3代， 即{[四川黄籽×(紫叶芥×四川黄籽)]×四川黄籽}×四川黄籽，获得了7个1个位 点显性、另一位点隐性的棕籽材料，他们分别是Y04816，Y04818，Y04Bi9，Y04820， Y04823，Y04825，Y04828。 3以四川黄籽，紫叶芥，紫叶芥×四川黄籽F．及四川黄籽×(紫叶芥×四川 黄籽)Bcl单株为材料，利用群分法(bulked sergeant a11alysis，BsA)进行种皮颜 色基因的定位。通过275个10—mer随机引物PCR分析，初步找到了与决定种皮颜 色基因连锁的分子标记S201000，S73800。 4在芥菜型油菜四川黄籽自交系和紫叶芥自交系中克隆了DFR基因片段，并 测序，二者该片段长度均为466碱基(base pair，bp)。并将这些序列在NcBI上用 BLAST进行序列同源比较。四川黄籽DFR序列与甘蓝型油菜Stellar(＆1assjca 加p“5)的二氢黄酮异构酶基因的同源性为99％(Expect=0．o)，可以认为该片段为四 川黄籽二氢黄酮异构酶基因的片段；它与甘蓝(assJca o』跚cPa)、芜菁 (胁s鲥ca，apa)的二氢黄酮异构酶基因的同源性分别为96％、93％；与白菜型 油莱(胁ssjGa c甜0加抬)、拟南芥(爿朋6j口劫s拈拍目-ja册j二氢黄酮还原酶 基因的同源性分别为93％、90％。紫叶芥DFR序列与甘蓝型油菜Stellar的二氢黄 酮异构酶基因的同源性为97％(Expec#O．O)，可以认为该片段为四川黄籽二氢黄酮 异构酶基因的片段；它与甘蓝、芜菁的二氢黄酮异构酶基因的同源性分别为96％、 94％；与白菜型油菜、拟南芥二：氢黄酮还原酶基因的同源性分别为9l％、90％。将 四川黄籽DFR基因片段的序列提交Genebank登记，序列号为AY518296。 关键词：芥菜型油菜；种皮颜色遗传；叶色遗传；PcR；RAPD分析；DFR克隆 Molecular Molecular Biological Studies of Seed Coat Color in oilseed Mustard r=昂r口譬譬如口，“nc叫 Abstract：The breeding of yellow seed coat rapeseed are attracted increasing attention by rapeseedbreeder The yellow—seed trait is economically benefical to the oilindust够 seeds of yellow cultivars have hi曲oil comem than血ose of dark—seed varieties．Yellow seeds of r印eseed have lo、vcr肋er and 1硒n，comp必珥with those of dark—seed varieties． Yellow seed also have higher protein coment thaIl dark seeds． The seed coat color heredity in。J叶nss】-cd，“”c已d is simple，the yellow coat seed is obviously difkrence to也e bro