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基因克隆的基本原理及实验技术 课时及内容安 排 第一课时: 基因克隆的基本概念及理论知识 第二课时: 基因克隆的操作过程及注意事项 第三课时: 实验操作过程演示(录像) 第一课基因克隆的基本概念及理论知识 基因克隆的定义： 什么是基因？ 1、基因是存在于细胞内有自体繁殖能力的遗传单位。 2、基因是一个具有遗传功能的特定核苷酸序列的DNA片段。 3、编码一个RNA或一条多肽链的DNA片段称为一个基因。 4、基因是生物体遗传的基本单位，存在于细胞的染色体上，作直线排列。 5、基因通过指导蛋白质的合成来传递遗传信息，从而控制生物的性状。 染色体、DNA 与基因之间的关系 基因的结构及其表达蛋白的过程 RT-PCR扩增基因的编码区序列 转录起始调控区（启动子区）的扩增 基因的编码区及启动子区序列必须通过连接到质粒上构建成重组表达载体，然后进行目的片段扩增及功能研究。 什么是质粒（Plasmid）？ 质粒的重要特征 限制性核酸内切酶 限制性核酸内切酶的命名法则 DNA连接酶 DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的，最初是在大肠杆菌细胞中发现的。它是一种封闭DNA链上缺口酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5’-PO4与另一DNA链的3’-OH生成磷酸二酯键将两条紧邻DNA链连接起来。 内切酶和连接酶是基因克隆实