胶原糖基化Glcα1和2Galβ1修饰基因GLT25D1敲低小鼠模型的制备.PDF

《中国肝脏病杂志（电子版）》2018年第10卷第2期 ·论著·25 胶原糖基化Glcα1和2Galβ1修饰基因 GLT25D1 （ ）敲低小鼠模型的制备 与基因型鉴定 1 2 1 2 3 4 5 6 1,2 1. 叶小慧, , , , , , , , （北京大学地坛医院教学 李玉凤 张一帆 何玲玲 张曼卡 马慧敏 肖凡 黄玉波 魏红山 100015 2. 100015 3. 医院 消化科，北京 ； 首都医科大学附属北京地坛医院 消化科，北京 ； 北京大学地坛 100015 4. 医院教学医院 中西医结合中心，北京 ； 首都医科大学附属北京地坛医院 中西医结合中心，北京 100015 5. 100015 6. ； 首都医科大学附属北京地坛医院 传染病研究所，北京 ； 首都医科大学附属北京地坛 医院 肝病中心，北京 100015 ） 摘要：目的 建立介导胶原糖基化Glcα1、2Galβ1修饰基因（GLT25D1 ）敲低小鼠模型，为研究其在肝 脏疾病中的作用奠定基础。方法 基于Cre-loxp重组酶系统，采用胚胎干细胞线性打靶技术，获得同 源重组的干细胞，繁殖嵌合体，获得杂合子GLT25D1+/- 小鼠。随后将GLT25D1+/- 小鼠自交。通过PCR 凝胶电泳技术对子代小鼠的基因型进行鉴定。采用Western blot技术检测GLT25D1在WT型小鼠（wild type ，WT ）和杂合子GLT25D1+/- 小鼠各组织的表达。比较WT和GLT25D1+/- 小鼠的生育情况、子代小 鼠基因型比例及出生20天的体重差异。结果 GLT25D1+/- 小鼠配笼繁殖的264 只子代小鼠中，杂合子 GLT25D1+/- 小鼠152只，WT小鼠112只，无GLT25D1-/- 小鼠。GLT25D1+/- 小鼠数量和WT小鼠数量的比 χ 2 P 值低于孟德尔遗传定律的2 ∶1 （ = 9.818 ， = 0.002 ）。Western blot示GLT25D1蛋白在WT小鼠的 心、肝、脾、肺、肾、脑和淋巴结等重要组织中均有表达，其中在肝、脾和肺中高表达，肾和淋巴 结中度表达，心和脑弱表达，GLT25D1+/- 小鼠各组织表达水平均低于WT型小鼠。WT和GLT25D1+/- 小 +/- t P 鼠在外观和行为上无显著差异，GLT25D1 小鼠出生后20天体重显著低于WT型小鼠（ = 2.520 ， = +/- t 0.0177 ）。GLT25D1 小鼠交配后平均每窝出生的鼠仔数目为4 只，低于WT小鼠平均鼠仔数7只（ = P -/-胚胎致死，且影响部