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分子生物学问题总结 简述三种原核DNA聚合酶的作用特点和主要功能 DNA聚合酶1: 1.能催化单个脱氧核糖核苷酸连接到DNA链的3端. 2.能沿5端到3端方向外切DNA(切除引物) 3.能沿3端到5端方向外切DNA(纠错,或者说DNA损伤的恢复) DNA聚合酶2: 1.发挥作用需要镁离子和铵根离子存在 2.同样能参与DNA聚合酶1参与的反应,但聚合活性低 3.能沿3端到5端方向外切DNA DNA聚合酶3: 1.主要负责DNA链的延伸 2.能沿3端到5端方向外切DNA 在DNA的复制中,DNA聚合酶3负责合成冈崎片段,而DNA聚合酶1负责将RNA 引物按逐个核糖核苷酸切除并替换成对应的脱氧核糖核苷酸,最后由DNA连接酶 把各冈崎片段连接起来,复制完成. 活性(37度时每个酶分子每分钟聚合的核苷酸数):DNA聚合酶1为600,DNA聚合 酶2为30,DNA聚合酶3为9000. 真核生物各种DNA聚合酶的功能 DNA聚合酶功能 α 合成引物,起始引发 β 低保真度复制 γ 线粒体DNA复制 δ 延长新链,同时可解开双螺旋 ε 填补缺口,修复,重组 DNA复制时RNA 引物是怎么切除的 原核生物DNA复制时RNA 引物是靠细胞核内的RNA酶水解的，水解后留下的 空隙由DNA-PolI （DNA聚合酶1）催化，从5 ‘到3’用dNTP为原料生成相 当于引物长度的DNA链，最后的缺口由DNA连接酶完成。 真核生物主要由DNA Polε来完成，过程同原核。 说明细菌Tn10转座子与玉米的Ac-Ds转座系统的主要异同点。 Tn10是一种复合转座子，大小为9300bp，具有抗四环素抗性基因。它的两端的 末端重复长22bp，但是，只有最靠近外侧的13bp是转座所必需的，该序列突 变，其转座作用丧失。这些突变的效应是顺式的，与它并存于同一细胞的野生型 组件不能恢复突变体的转座能力。 Ac-Ds体系的自主转座子Ac长4563bp，转录生成单一RNA，剪接后的RNA长 3500bp，含一个由807个密码子组成的阅读框，被4个内含子分割成为5个外 显子。转座子Ac两端有11bp的反向重复序列。在其靶DNA位点，复制形成 8bp正向重复。已知所有Ds都是转座子Ac的缺失突变体，如9缺失194bp。 非自主转座子虽然缺失内源序列，但是其两端转座特征序列是完整的，只有细胞 内有相应的转座酶活性，它才能恢复转座性能。 两者的相同点为 ： (1)在转座因子的两端，都有末端重复序列。 (2)都有可读框，编码转座酶，促进转座因子的转座。 (3)受体DNA上都有一段靶序列，转座因子导致靶序列两侧出现正向重复序列。 两者的不同点为 ： (1)Tn10具有抗四环素抗性基因，当其转入宿主细胞后，宿主细胞具有抗药性。 (2)Ac-Ds体系由自主转座子Ac和非自主转座子组成。Ac具有自主剪接和转座功 能。Ds单独存在是稳定，不能转座。 细菌的RNA聚合酶 在细菌中，相同的酶催化三种RNA 的合成 ：信使RNA （mRNA）、核糖体RNA （rRNA）及转运RNA （tRNA）。 RNA聚合酶是相对大的分子。核心酶有5个亚基 （~400kDa） ： α2 ：这两个α亚基组合成酶及辨认调节因子。每个亚基有两个区，αC末端区及 αN末端区，分别与启动子结合及与聚合酶的其他部分结合。 β ：有着聚合酶的活动，负责催化RNA 的合成。 β ：与DNA结合。 ω ：还未清楚它的功能。但是它在耻垢分枝杆菌中似乎是提供保护功能予β亚基。 σ因子:为着与启动子的特定区域结合，核心酶须有其他亚基，称为σ。σ因子可以 极大地提高RNA聚合酶对启动子区DNA 的亲和力，σ因子大大减低RNA聚合酶 与非特定的DNA 的关系，视乎σ因子本身而增加对某些启动子区域的独特性。 所以完整的全酶有着6个亚基 ：α2、β、β、σ及ω （~480kDa）。RNA聚合酶 的结构就有一个长约55Å （即5.5纳米）的沟道及直径为25Å （2.5纳米）。这 个沟道正好适合20Å （2纳米）的DNA双股。55Å的长度可以接受16核苷酸。 当不使用时，RNA聚合酶会与弱结合部位结合，等待活性启动子的位点开启并 快速转换。RNA聚合全酶所以在不使用时不是在细胞内自由浮动的。 真核生物的RNA聚合酶 真核生物有着几种RNA聚合酶 ： RNA聚合酶 Ｉ合成核糖体RNA （rRNA）前体45S，当成熟后会成为28S、18S 及5.8S核糖体RNA，是将来核糖体的主要RNA部分。 RNA聚合酶Ⅱ合成信使RNA （mRNA）的前体及大部分小核RNA （