课件：基因诊断与治疗.ppt

殷享亮、刘文彬、韩学超、 许小兵、刘长涛 膀胱癌介绍 据国际癌症组织机构统计，膀胱肿瘤作为泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，是目前导致人类因肿瘤死亡的第四大原因。 在中国，膀胱癌是排列第十位的常见肿瘤。 膀胱癌具有多发性、复发性的特点。 TERE1/UBIAD1简介 移行上皮反应基因(Tansitional epithelial response gene，TERE1)是人类一类新的直接与前列腺癌、膀胱癌有关的基因。该基因编码一个含338个氨基酸，分子量约为36.skDa的蛋白质，广泛表达于人类各种正常组织的基因，特别是泌尿系统上皮如前列腺、膀胱、肾脏等 TERE1具有多个疏水结构域，因其编码UbiA类异戊系转移酶，又称之为UBIAD1 研究表明在前列腺癌、肾癌及癌细胞系中，TERE1基因和蛋白表达水平显著下降，而通过基因转染在前列腺癌细胞中过表达TEREI，能显著减少肿瘤的增殖和维持基因组的稳定 推测TERE1/UBIAD1基因可能是一类新的抑癌基因 目的 检测分析临床膀胱癌组织和正常膀胱组织TERE1/UBIAD1表达及Ras-MAPK信号通路的变化。 方法 采用免疫组化检测分析人正常膀胱组织及膀胱癌组织中TERE1和端粒逆转录酶(hTERT)的蛋白表达水平:用RT-PCR及 westemblotting检测膀胱癌组织中TEREI和hTERT的表达水平及Ras-MAPK信号通路关键分子的变化 hTERT作为端粒酶活化的限速酶，在正常组织的增生和肿瘤的发生中起着至关重要的作用。研究表明人类多种肿瘤组织中均可检测到hTERT的活性表达，而在正常膀胱组织中却未检测到。 膀胱癌及正常膀胱组织标本中TEREI与hTERT免疫组化结果 结果---免疫组织化学染色分析 HE染色 Normal bladder Bladder carcinoma TERE1(正常膀胱组织) （膀胱癌组织） hTERT正常膀胱组织 膀胱癌组织 膀胱癌及正常膀胱组织标本中TERE1与 hTERTmRNA水平 Lanel:200bpMarker: Lane2:正常膀胱TERE1(500bp)mRNA水平; Lane3:膀胱癌标本中TERE1mRNA水平; Lane4:正常膀胱组织hTERT(182bP)mRNA水平; Lane5:膀胱癌标本中hTETmRNA水平。下方胶图:对应组织中内参 GAPDHmRNA水平。  膀胱癌组织中TERE1表达水平相对于正常膀胱组织明显降低， TEREI表达水平与癌组织的分级分期密切相关，随着肿瘤恶性程度增加，癌组织TEREI表达下降越明显。 膀胱癌组织中检测到hTERT明显表达，而正常膀胱组织未检测到hTERT表达。 膀胱癌及正常膀胱标本中TERE1与hTERT蛋白表达 相对正常组织，膀胱癌中TERE1蛋白表达明显下降，统计分析具有显著性差异，P0.01，高恶性度膀胱组织中未检测到TERE1蛋白表达。 正常膀胱组织没有检测到hTERT蛋白表达水平，而膀胱癌组织中hTERT明显高表达。 Ras-MAPK信号通路中关键分子在组织中蛋白表达水平 与正常膀胱组织相对比，膀胱癌组织中磷酸化ERK、磷酸化MEK(1/2)、磷酸化B-Raf(Ser455)及磷酸化C-Raf(Ser338)蛋白表达水平明显增加，有显著性差异(P0.05); 而膀胱癌组织与正常膀胱组织中总的ERK、MEK(1/2)、A一Raf、B一Raf、C一Raf及磷酸化A一Raf(Ser299)蛋白表达水平没有明显差异。 未检测到膀胱癌组织中磷酸化的C-Raf(Ser259)和磷酸化的C-Raf(Ser289/296)蛋白表达。 讨论 为探讨TEREI与膀胱癌的关系， 我们的免疫组化实验结果显示:膀胱癌T2、T3一4期TEREI染色阳性率与Ta、TI期阳性率相比，具有显著性差异。 根据组织学分级，G3一4期TEREI染色阳性率与G2期TEREI相比具有显著性，与GI期阳性率相比差异具有极显著性。 讨论 根据逆转录PCR和免疫印迹结果显示：膀胱癌组织中TEREI核酸转录与蛋白翻译水平与正常膀胱组织相比明显下降。 提示TERE1与膀胱癌相关。随着肿瘤恶性程度增加，癌组织TERE1表达下降越明显，呈负相关。 TERE1与膀胱癌的关系 我们采用免疫印迹分析了膀胱癌组织中Ras-MAPK信号通路中一系列关键分子的变化。发现: 膀胱癌组织中磷酸化ERK、磷酸化MEK(1/2)、磷酸化B-Raf(Ser455)及磷酸化e-Raf(Ser338)蛋白表达水平明显增加，有显著性差(P0.05); TERE1与膀胱癌