分子诊断应用于齿类实验动物的健康监控.ppt

杭州赫贝，专业实验外包服务 联系人：李海分子诊断应用于啮齿类 实验动物的健康监控 排除(隔离): 进入设施前对大小鼠进行筛查 监控:监控啮齿动物健康状况的变化 本讲主要关注于监测 -环境，传染性疾病，遗传学，饲养技术和物料 健康监控=检查动物是否符合健康要求的质控措施 目录 ?目标 ?要求（应排除微生物列表) ?标准（如何定义阳性） ?项目 -测试方法 -样品 -频率 目标（健康监控能为您做什么？） 通过以下方式，促进高质量（稳定）的研究 -（隔离检疫区）-排除可能干扰研究的已感染动物 -（实验区）-检测特定区域内需排除病原体 很难发现首发病例，其真正意义在于寻找病原体扩散的证据 其他原因：传染媒介，质量监控，需要向合作方运输等等 目录 ?目标 ?要求（应排除微生物列表) ?标准（如何定义阳性） ?项目 -测试方法 -样品 -频率 要求最好符合您的需求 – 重点关注发生在您设施的会影响实验的传染性病原 –排除列表过长会危及实验项目 传染性疾病的要求=排除列表 应排除病原体列表 病毒：触发机体的全身反应– 白细胞介素、B细胞及T细胞，感染一般较迅速，影响轻微和短暂，不可在环境中复制存活易排除。 细菌：疾病一般由病原体入侵或者其产生的外毒素引起，可在环境中增殖，难排除。 真菌：出现明显病变时，考虑培养辨认。 寄生虫：除少数非致病物种，一般不允许存在。 目录 ?目标 ?要求（应排除微生物列表) ?标准（如何定义阳性） ?项目 -测试方法 -样品 -频率 重点关注亚临床感染 -若出现临床疾病，需进行调查 权衡哪些项目会影响您的工作 -一个标准不能适用于全部 -一个动物房可能有多重标准 1.免疫正常vs.免疫缺陷动物 2.短期研究vs.长期研究 -不同的病原体在不同时期繁殖的速率和影响不同 啮齿类动物健康评判标准 从第一只动物感染到检测出来一般会延迟数周至数月 尽量选择主要病原体进行检测 -明显疾病的病原体 -影响研究结果的病原体（特定领域） -官方应排除的病原体（认证，发文章） 评判标准 质控程序确认动物是否符合评判标准 组成部分 -样品- ?动物的-品系、年龄、样品种类（血清、粪便，等等）、是否暴露？ ?环境的-位置（静压箱（plenum)、过滤器，等等） -样品数量？ -检测频率？ -安排、执行及报告 基于评判标准的质控程序 目录 ?目标 ?要求（应排除微生物列表) ?标准（如何定义阳性） ?项目 -测试方法 -样品 -频率 哨兵鼠选择 敏感种属，雌性，封闭群，每盒至少2只 暴露方法 接触法（最有效，但不实用） 脏垫料法（100%脏垫料，常用） 检测间接并有延迟 通过哨兵鼠采样 大体和显微镜检测(病理) 分离培养 直接检测（PCR） 抗体血清学 检测方法 目录 ?目标 ?要求（应排除微生物列表) ?标准（如何定义阳性） ?项目 -测试方法 -样品 -频率 运输样本 – 血清（用5倍体积的PBS稀释）用于检测之前暴露的病毒 – 粪便、口腔拭子、毛皮拭子，使用PCR方法检测细菌、寄生虫和病毒（目前感染的） – 毛皮拭子（扯下或粘下的毛发亦可），使用PCR来检测管状线虫属（Syphacia） 和皮螨；或者是环境拭子——采自于IVC笼架，可以替代毛皮拭子。 – 病变部位用10%的中性福尔马林缓冲溶液浸泡，进行组织病理学检查 – 鼻咽棉拭子进行PCR检测 活体动物运输检测 收集样本 目录 ?目标 ?要求（应排除微生物列表) ?标准（如何定义阳性） ?项目 -测试方法 -样品 -频率 监控一般针对能真正威胁到设施安全的微生物，而非一些不常见的微生物 大多数的设施监控会针对流行病原体至少每季度检一次，对于其他病原体则一年检一次 质量控制（QC）频率