0302基左因抑制对细胞生长和增殖的影响.pptVIP

第五部分 POLD1基因表达受到抑制后对MCF-7细胞的生长及周期的影响 实验方法 Trizol提取MCF-7细胞总RNA 反义POLD1表达重组质粒pXJ41-as-POLD1的构建及鉴定 细胞转染及稳定表达细胞株的筛选 细胞生长曲线实验 血清依赖性实验 单细胞克隆形成实验 软琼脂集落形成实验 胸腺嘧啶核苷（TdR）双阻断法同步化MCF-7细胞 流式细胞光度术（FCM）进行细胞周期分析 Western blot鉴定转染细胞中特异性蛋白的表达 反义RNA 反义RNA是指与mRNA互补的RNA分子, 也包括与其它RNA互补的RNA分子。由于核糖体不能翻译双链的RNA，所以反义RNA与mRNA特异性的互补结合, 即抑制了该mRNA的翻译。 近年来通过人工合成反义RNA的基因, 并将其导入细胞内转录成反义RNA, 即能抑制某特定基因的表达,阻断该基因的功能, 有助于了解该基因对细胞生长和分化的作用。 结果与讨论 生长曲线的测定 血清依赖性实验结果 单细胞克隆形成率的比较 软琼脂集落形成比较 TdR 双阻断细胞后，流式细胞光度术（FCM）观察转染细胞周期的变化 Western blot检测转染细胞中周期相关基因的表达 引物设计 上游： 5’ ATG TTT GGG TAC CAC GGG CAC 3’ 631 gctcccgaga gagcatgttt ggg