实验七 干旱和度对植物体内游离脯氨酸积累的影响.pptVIP

实验七 干旱和盐度对植物体内游离脯氨酸积累的影响 【实验目的和意义】 生长在干旱和盐度环境中的植物，体内常积累游离的氨基酸，而游离氨基酸积累的量又往往与环境干旱的程度、盐度和植物对干旱和盐度的抵抗力（即抗逆性）有关。因而，测定植物体内游离脯氨酸的含量，在一定程度上可从生理上了解植物受环境水分和盐度胁迫的情况，了解植物对水分和盐分胁迫的耐受性和抵抗能力，在生产上和育种学上有一定的意义。 【实验原理】 磺基水杨酸对脯氨酸有特定反应，当用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸溶液中。然后用酸性茚三酮加热处理后，茚三酮与脯氨酸反应，生成稳定的红色化合物，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波长下测定吸光度，即可从标准曲线上查出脯氨酸的含量。 【实验材料】 充足供水的小麦幼苗 干旱处理7天的小麦幼苗 经100mmol/L NaCl处理5天的小麦幼苗 经200mmol/L NaCl处理5天的小麦幼苗 【实验器材和试剂】 分光光度计；电子分析天平；离心机；小烧杯；普通试管；移液管；注射器；恒温水浴锅；漏斗；漏斗架；滤纸；剪刀；洗耳球。 2.5﹪酸性茚三酮溶液配制：将1.25g茚三酮溶于30ml冰醋酸和20mL 6mol/L磷酸中，搅拌加热（70℃）溶解，贮于冰箱中。 3％磺基水杨酸配配制：3g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100mL。 10μg/mL脯氨酸标准母液配制：精确称取20mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，再倒入200ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度（为100μg/mL脯氨酸母液），再吸取该溶液10ml, 加蒸馏水稀释定容至100mL, 即为10μg/mL脯氨酸标准液。 冰醋酸。 甲苯。 【实验步骤】 样品的测定 称取不同处理的植物叶片各0.5g，分别置大试管中，然后向各管分别加入5ml 3％的磺基水杨酸溶液，在沸水浴中提取10min（提取过程中要经常摇动），冷却后过滤于干净的试管中，滤液即为脯氨酸的提取液。 吸取2ml提取液于带玻塞试管中，加入2ml冰醋酸及2ml 2.5﹪酸性茚三酮试剂，在沸水浴中加热30min，溶液即呈红色。冷却后加入5ml甲苯，摇荡30秒钟，静置片刻后，测定萃取液在520nm处的吸光值。 【结果计算】 从标准曲线上查出样品测定液中脯氨酸的含量，按下公式计算样品中脯氨酸含量： 【注意事项】 配置的酸性茚三酮溶液仅在24 h内稳定，因此最好现用现配。 试剂添加次序不能出错。 * * 植物生物学实验-植物生理部分 脯氨酸标准曲线的制作 取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～20μg的脯氨酸标准液。 混匀后，置于沸水浴上加热30min，冷却。 各试管加入5mL甲苯，振荡30秒钟，静置片刻，使色素全部转至甲苯溶液。 以甲苯溶液为空白对照，在520mm波长处测定吸光度（A）值。以脯氨酸含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。 20 16 12 8 4 2 0 每管脯氨酸含量（μg） 2 2 2 2 2 2 2 2.5﹪酸性茚三酮（mL） 2 2 2 2 2 2 2 冰醋酸（mL） 0 0.4 0.8 1.2 1.6 1.8 2 蒸馏水（mL） 2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0.2 0 10μg/mL脯氨酸标准液(mL) 6 5 4 3 2 1 0 管 号 试 剂 X × 提取液总量（mL） 脯氨酸含量（μg/g）＝ ——————————————————— 样品鲜重（g）× 测定时提取液用量（mL） 公式中：X －从标准曲线中查得的脯氨酸量（μg）