半滑舌鳎Cynoglossussemilaevisc-Jun基因的克隆-渔业科学进展.PDF

第38 卷 第2 期 渔 业 科 学 进 展 Vol.38, No.2 2 0 1 7 年 4 月 PROGRESS IN FISHERY SCIENCES Apr., 2017 DOI: 10.11758/yykxjz.20160125001 / 半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis) c-Jun 基因的克隆及免疫应答分析* 1,2 1,2 2,3 2 2 于孟君 孙璐明 陈亚东 陈学杰 杨 光 1 1 2,3① 刘 洋 仇雪梅 沙珍霞 (1. 大连海洋大学水产与生命学院 大连 116023 ；2. 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室 中国水产科学研究院黄海水产研究所 青岛 266071 ；3. 青岛大学生命科学学院 青岛 266071) 摘要 半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)AP-1 家族转录因子c-Jun 基因(Jun proto-oncogene)及其在 免疫应答中的作用尚无报道。本研究根据半滑舌鳎转录组数据库中预测的c-Jun 序列，通过RACE 技术和PCR 扩增方法获得了半滑舌鳎c-Jun 基因cDNA 全长2093 bp ，CDS 区域共981 bp ，编码 326 个氨基酸，5 UTR 区域377 bp ，3 UTR 区域735 bp。SMART 分析显示，C-JUN 蛋白具有2 个 结构域：AP-1 家族典型结构域 Jun ，以及高度保守的亮氨酸拉链结构域(BRLZ)。经蛋白多序列同 源比对、系统进化树分析，发现半滑舌鳎c-Jun 与虹鳟(Oncorhynchus mykiss) c-Jun 亲缘关系最近。 实时荧光定量PCR 分析显示，c-Jun 基因在半滑舌鳎不同组织中普遍表达，在卵巢中表达量最高。 鳗弧菌(Vibrio anguillarum)人工感染半滑舌鳎后，c-Jun 基因在肝脏、脾脏、头肾、小肠、鳃、血液 中表达量都出现不同程度上调，其中，鳃中变化最明显：感染12 h 后表达量达到0 h 时的13.20 倍。 使用LPS 、PGN 、PolyI:C 和WGP 病原模拟物刺激半滑舌鳎外周血淋巴细胞，结果显示，WGP 诱 导c-Jun 基因上调表达，而LPS 与PolyI:C 均下调基因表达。以上实验结果表明，c-Jun 基因在半滑 舌鳎的免疫防御中发挥重要作用。 关键词 半滑舌鳎；转录因子c-Jun 基因克隆；表达分析；病原感染；免疫应答 中图分类号 Q522 文献标识码 A 文章编号 2095-9869(2017)02-0031-09 原癌基因 c-Jun 是促分裂原活化蛋白激酶 AP-1 因的转录(Angel et al, 1988; Bohmann et al, 1987)。 (Activator protein 1)复合物家族的一个重要转录因 JUN 蛋白以及FOS 蛋白组成DNA 结合蛋白，根据不 子。AP-1 复合物包括Jun (Jun proto-oncogene)(c-jun 、 同的生物体信号指挥转录调节基因的表达，它主要参 jun -B 和jun -D) 、Fos(c-Fos 、Fos-B 、Fra -1 和Fra -2) 与体内免疫应答，调节细胞增殖分化、肿瘤生长、细 及Atf (Activating transcription factor) 因子(Eferl et al, 胞死亡(Blau et al, 2012; Karin et al,