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凝血酶说明书 沈阳拜英生物技术有限公司 第 PAGE 1 页 共 NUMPAGES 2 页 凝血酶说明书 凝血酶（Thrombin）来源于牛血浆，分子量37KD，是由两条肽链（31KD和6KD）通过二硫键组成的。凝血酶是凝血酶原（凝血因子 Ⅱ）激活后形成的蛋白质水解酶，其催化纤维蛋白原（fibrinogen）水解掉A肽和B肽，由此形成纤维蛋白单体，单体进一步聚合，在血小板、红细胞和白细胞等参与下形成血凝块。 由于凝血酶具有切割序列专一性强，水解效率高的特点，它被广泛地应用于基因工程产品的开发，其应用之一是作为工具蛋白酶用于重组融合蛋白质的特异性断裂，尤其适用于生物工程制药业及基因工程、生物化学、分子生物学等研究。 凝血酶是一种广泛用于切割标签的蛋白酶，能够有效切质量比仅为1:2000的蛋白。切割可在20℃到37℃之间切割0.3到16小时。凝血酶最佳的切割位点是X4-X3-P-R[K]-X1-X2,这里X4 和 X3 是疏水氨基酸而X1和 X2是非酸性氨基酸，一些经常使用的识别位点是L-V-P-R-G-S,L-V-P-R-G-F,和MY-P-R-G-N。在X4-X3-P-R-G-X2之间切割比在X4-X3-P-K-L-X2更有效。其他识别位点是 X2-R[K]-X1, 这里X2 或者 X1是甘氨酸，例如A-R-G和G-K-A，这里切割发生在第二个残基后。在凝血酶切割位点和N末端标签之间插入五个甘氨酸残基可改善切，通过这一甘氨酸连接肽只需较少酶量就可达到完全切割,而且也可以避免可能发生的错误切割。有效的消化缓冲液是20mMTris-HCl缓冲液,含150mM氯化钠,pH8.0。凝血酶可从切割产物中用p-氨基琼脂糖亲和纯化,或者苯甲脒琼脂糖移去。 产品特点： 1、纯度高：SDS检测图谱无杂蛋白条带； 2、比活高：比活力大于2000单位/mgpr； 3、不含有其他蛋白酶活性； 凝血酶切割样品SDS比较图谱： 泳道1为切割前样品，泳道2为采用sigma凝血酶（货号：T6634）切割后样品，泳道3、4为采用sigma凝血酶（货号：T4648）切割后样品，泳道5、6为采用自制凝血酶切割后样品。 4、产品稳定性好：冻干产品在室温条件下考察12个月，酶活力未见显著变化，冷藏条件下保存36个月，酶活力未见显著变化。 SDS图谱：泳道1为自制凝血酶（非还原），泳道2为sigma公司凝血酶（非还原）；泳道3为自制凝血酶（还原），泳道4为sigma公司凝血酶（还原） 沈阳拜英生物技术有限公司 联系电话：024-8973896718610814965