第三章第一节光谱分析技术.pptVIP

学习目标 1.能说出临床生物化学检验常用分析技术名称 2.掌握光的吸收定律，理解吸光系数的意义和应用 3.叙述分光光度技术的定量测定方法 4.知道火焰光度法、比浊法、原子吸收分光光度法荧光分析法的原理、影响因素和主要应用 是能的一种表现形式，是电 磁波的一种。光在真空中以直 线方式传播，在不同的介质处 发生反射、折射、衍射、色散、 干涉和偏振等现象。可用波长、 频率、传播速度等参量来描述 即光具有“波动性”。光的颜色 即由光的波长决定，人眼能感 觉到的光称为可见光，其波长 在400～750nm之间。在可见 光之外是 红外光760~1000nm 紫外光200~400nm 光子的能量与波长的关系为 E=hυ= hc／λ 式中E为光子的能量（J：焦耳） υ为频率 h为普朗克常数（6.63×10-34J?S） c为光速 λ为光的波长 因此，不同波长的光，其能量不同，短波能量大，长波能量小。 什么是光谱分析技术？ 光的波长（λ） 单位用纳米（nm） 各种化学物质都具有一定的光谱特性，表现在能选择性吸收、 发射或散射某种波长的光。利用物质的吸收光谱、发射光谱 或散射光谱特征对物质进行定性、定量分析的技术称为光谱 分析技术。 光谱分析技术原理： 利用各种化学物质都具有发射、吸收或散射光谱谱系的特 征，以此来确定物质性质、结构或含量。 光谱分析技术分类： 发射光谱分析技术：火焰光度法、荧光法 吸收光谱分析技术：紫外、红外、原子、可见光分光光度法 散射光谱分析技术：比浊法 一、分光光度技术的基本原理 （一）光的吸收现象和吸收曲线 物质的颜色是由于其分子选择性吸收了可见光范（400~760 nm）内不同 波长的光线后透过或反射出相应颜色的结果。 不同浓度的一种被测物质对不同波长光线的吸 收点绘制成曲线，则称为吸收光谱（吸收曲线）。 1.吸收曲线的峰值高低和溶液浓度有关 2.溶液浓度愈高，吸收光强度愈大。 事实上：无论物质有无颜色，当有一定波长光线通 过时都能产生一定程度的吸光度。 不同分子结构的物质，浓度不同，尽管峰 值高低不易，但吸收峰位置曲线形状相同。 结论：各种物质吸收曲线的形状和物质的特征有关，故可作为物质定性的依据。 光的显色原理 若把某两种颜色的光，按一定的强度比例 混合，能够得到白色光，则这两种颜色的 光叫做互补色。图中处于直线关系的两种 光为互补色。如绿光和紫光为互补色， 黄光和蓝光为互补色等等。 各种溶液会呈现出不同的颜色，其原因是 溶液中有色质点（分子或离子）选择性地 吸收某种颜色的光。 实验证明：溶液所呈现的颜色是其主要吸收 光的互补色。如一束白光通过高 锰酸钾溶液时，绿光大部分被选 择吸收，其它的光透过溶液。从 互补色示意图可以看出， 透过光 中只剩下紫色光，所以高锰酸钾 溶液呈紫色。 （二）光的吸收定律 溶液颜色的深浅与浓度之间的关系可 以用吸收定律来描述。它是由约 翰·海因里希·朗伯和奥古斯特·比尔相 结合而成的，所以叫朗伯-比尔定律。 当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散 射的吸光物质时，与其吸光度A与吸光度C 及吸收物质的浓度厚度b成正比。 溶液对光的吸收 当一束强度为I的平 行单色光照到溶液时，一部分光被溶 液吸收，一部分光被界面散射，其余 的光则透过溶液，如图所示 结论： I0=I a+ I r+ I t I0--入射光强度 I a--吸收光强度 I r--反射光强度 I t--透射光强度 通常由于I r很小可忽略不计，上式可简化为 I0=I a+ I t 透射光I t与入射光强度I0之比为透光率或透 光度，用T表示： T= I t/ I 0 透光率的负对数称为吸光度或光密度或消光 度，用A表示： A=－lgT=lg1/T=lgI 0/ I t 吸光度越大，表示该物质对光的吸收越强。透光度和吸光度都是用来表示 入射光被吸收的程度，它们之间可据式相互换算。 实验证明：单色光经过有色溶液时，透过溶液的光强度不仅与溶液的浓度