- 1、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 5、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
* * * * * * * * * 二、固定化酶的性质 酶在水溶液中以自由的游离状态存在,但是固定后酶分子便从游离的状态变为牢固地结合于载体的状态,其结果往往引起酶的性质的改变。为此,在固定化酶的应用过程中,必须了解固定化酶的性质与游离酶之间的差别,并对操作条件加以适当调整。 由于固定化的方法不同,固定化酶的活力和性质也有所不同。 三、酶活力 固定化酶的活力在多数情况下比天然酶的活力低,其原因可能是: ①酶活性中心的重要氨基酸残基与水不溶性载体相结合; ②当酶与载体结合时,它的高级结构发生了变化,其构象的改变导致了酶与底物结合能力或催化底物转化能力的改变; ③酶被固定化后,虽不失活,但酶与底物间的相互作用受到空间位阻的影响。 也有在个别情况下,酶经固定化后其活力升高, 可能是由于固定化后酶的抗抑能力提高 使得它反而比游离酶活力高。 四、固定化酶的稳定性 游离酶的一个突出缺点是稳定性差,而固定化酶的稳定性一般都比游离酶提高得多,这对酶的应用是非常有利的。其稳定性增强主要表现在如下几个方面: (1)操作稳定性 酶的固定化方法不同,所得的固定化酶的操作稳定性亦有差异。固定化酶在操作中可以长时间保留活力,一般情况下,半衰期在一个月以上,即有工业应用价值。 (2)贮藏稳定性 固定化可延长酶的贮藏有效期。但长期贮藏,活力也不免下降,最好能立即使用。如果贮藏条件比较好,亦可较长时间保持活力。例如,固定化胰蛋白酶,在0.0025mol/L磷酸缓冲液中,于20℃保存数月,活力尚不损失。 (3)热稳定性 热稳定性对工业应用非常重要。大多数酶在固定化之后,其热稳定性都有所提高,但也有一些酶的耐热性反而下降。一般采用吸附法来进行酶的固定化时,有时会导致酶热稳定性的降低。 (4)对蛋白酶的稳定性 酶经固定化后,其对蛋白酶的抵抗力提高。这可能是因为蛋白酶是大分子,由于受到空间位阻的影响,不能有效接触固定化酶。例如,千畑一郎发现,用尼龙或聚脲膜包埋,或用聚丙烯酰胺凝胶包埋的固定化天门冬酰胺酶,对蛋白酶极为稳定,而在同一条件下,游离酶几乎全部失活。另外固定化后酶对有机试剂和酶抑制剂的耐受性也得到了提高。 (5)酸碱稳定性 多数固定化酶的酸碱稳定性高于游离酶,稳定pH范围变宽。极少数酶固定化后稳定性下降,可能是由于固定化过程使酶活性构象的敏感区受到牵连而导致的。 五、固定化酶的反应特性 固定化酶的反应特性,例如,底物特异性、酶反应的最适pH、酶反应的最适温度、动力学常数、最大反应速度等均与游离酶有所不同。 (1)底物特异性 固定化酶的底物特异性与底物分子量的大小有一定关系。一般来说,当酶的底物为小分子化合物时,固定化酶的底物特异性大多数情况下不发生变化。例如,氨基酰化酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖异构酶等,固定化前后的底物特异性没有变化; (2)反应的最适pH 酶被固定后,其最适pH和pH曲线常会发生偏移,原因可能有以下三个方面:一是酶本身电荷在固定化前后发生变化;二是由于载体电荷性质的影响致使固定化酶分子内外扩散层的氢离子浓度产生差异;三是由于酶催化反应产物导致固定化酶分子内部形成带电荷微环境。 (3)反应的最适温度 固定化酶的最适反应温度多数较游离酶高,如色氨酸酶经共价结合后最适温度比固定前提高5~15℃,但也有不变甚至降低的。固定化酶的作用最适温度会受固定化方法以及固定化载体的影响。 (4)米氏常数 米氏常数Km反映了酶与底物的亲和力。酶经固定化后,酶蛋白分子的高级结构的变化以及载体电荷的影响可导致底物和酶的亲合力的变化。使用载体结合法制成的固定化酶Km有时变动的原因,主要是由于载体与底物间的静电相互作用的缘故。 (5)最大反应速度 固定化酶的最大反应速度与游离酶大多数是相同的。有些酶的最大反应速度会因固定化方法的不同而有所差异。 乙酰 -DL — Ala L — Ala +乙酸 乙酰 -D — Ala Aminoacylase 氨 基 酰 化 酶 7.6 固定化酶的应用 世界上第一种工业化生产的固定化酶。1969年,日本田边制药公司将从米曲霉中提取分离得到的氨基酰化酶,用DEAE-葡聚糖凝胶为载体通过离子键结合法制成固定化酶,将L-乙酰氨基酸水解生成L-氨基酸,用来拆分DL-乙酰氨基酸,连续生产L-氨基酸。剩余的D-乙酰氨基酸经过消旋化,生成DL-乙酰氨基酸,再进行拆分。生产成本仅为用游离酶生产成本的60%左右。 泵 储 罐 反应产物 离心机 消旋反应器 固定化酶柱子 晶体 L-Ala L-Ala A-D-Ala A-L-Ala A-D-Ala 高果糖浆的生产 世界上生产规模最大的一种固定化酶。将培养好的含葡萄糖异构酶
您可能关注的文档
最近下载
- 阿联酋航空介绍(共33张PPT).ppt VIP
- 国企纪委书记竞聘面试题笔试题4套和专业题26问及答案.docx VIP
- 现场仪表 温度仪表WEST 8100+温控器说明书.pdf
- 张正友相机标定法课件.pptx VIP
- 某著名企业供应链咨询构建高效协同的销售与采购供应链战略供应链管理(61页PPT).pptx VIP
- 成人肺功能检查技术进展及临床应用推荐指南(2025版)解读.docx VIP
- 中国徐州PPT课件.pptx VIP
- 第1节 温度 (课件)人教版初中物理八年级上册(39页PPT).pptx VIP
- 船舶结构与货运PPT完整全套教学课件.pptx VIP
- 网络与新媒体概论PPT课件3.pptx VIP
文档评论(0)