超速离心高效液相色谱测定都血清高密度脂蛋白和低密度脂蛋白胆固醇：一种候选参考方法.pptVIP

* 超速离心-高效液相色谱测定血清高密度脂蛋白 和低密度脂蛋白胆固醇：一种候选参考方法 ? ? 董军 国汉邦 陈文祥 卫生部老年医学研究所 HDL-C降低 和LDL-C升高，是明确的心血管病独立危险因素 心血管病防治工作需要准确的HDL-C和LDL-C测定结果 建立和保证HDL-C和LDL-C常规测定结果的准确性需要 可靠的参考方法 HDL-C 和LDL-C准确测定 必要性 美国疾病控制与预防中心(CDC) ?定量法 D=1.006 超速离心分离极低密度脂蛋白（VLDL）， 制备底部组分（BF）( 包括IDL, LDL, HDL和Lp(a)等） 用肝素-锰离子试剂沉淀BF中的?脂蛋白，制备HDL组分 分别用AK胆固醇参考方法测定BF 胆固醇(BFC)和HDLC， 自BFC中减去HDLC得LDL-C (包括IDL和Lp(a)) 样品量大(5 mL)，其应用受到可得样品量限制 LDL和HDL的分离采用化学沉淀法，影响因素较多 样品制备需多部手工容量操作，费时，技术要求高 受超速离心转头品种的限制，每次分析最多18 个样品 由于脂蛋白的不稳定性，样品制备过程（约需24-28小时） 本身造成HDL-C和LDL-C的变化 ?-定量法存在的问题 血清脂蛋白胆固醇的体外再分布 超速离心法: 各类脂蛋白的定义方法，在分析化学上可能 也是最可靠的脂蛋白分离方法，是一种物理分离方法， 影响因素最少。 电泳法: 很难用于精密脂蛋白分析。 沉淀法: 沉淀剂和沉淀条件多种多样，影响因素多， 较难实现一致的特异性。 脂蛋白的分离方法 超速离心中的定量操作困难、繁琐，样品量大 部分Lp(a)在HDL密度范围内，造成HDL测定偏差 超速离心法（结合精密胆固醇分析） 参考方法 血清脂蛋白的密度分布 LDL HDL VLDL Lp(a) Lp(a)是二硫键连接的LDL-apo(a)复和体，还原剂 可使Lp(a)解离为LDL[Lp(a-)]和apo(a). Lp(a-)密度与LDL相近，或略小于LDL. 若能建立条件，使Lp(a)解离，又不改变HDL的密度 性质，则可实现HDL的超速离心分离. Lp(a) LDL-apo(a)复合体 不同密度下ME对超速离心BFC的影响 ME对血清脂蛋白密度的影响 样品溶液中ME浓度对1.063密度下超速离心BFC的影响 取来自不同个体的血清49 份 在1.063背景密度及ME（0.05 mol/L）存在和不存在下 超速离心，测定BFC（BFC1.063ME(+)和BFC1.063ME(-)） 用免疫比浊法测定Lp(a)质量 用DCM测定HDLC（HDLCDCM） ME 解离Lp(a) 有效性 BFC1.063ME(-)与BFC1.063ME(+)之差与Lp(a)的关系 (r=0.848) BFC1.063ME(-)与BFC1.063ME(+)之差与HDLC的关系  ( r=0.093,) BFC1.063ME(+)与 HDLCDCM之差与Lp(a)的关系 （r = 0.414, P0.005） Lp(a)可与 ?脂蛋白发生非共价键结合 此种结合不能被超速离心完全解离 脯氨酸可以消除Lp(a)与其他脂蛋白的非共价结合 在d =1.150背景密度下试验脯氨酸的作用: 在ME存在下，无脯氨酸时约10％的Lp(a)免疫原性分布在顶部 在ME存在下，含脯氨酸时顶部组分中无Lp(a)免疫原 性 提示血清经ME作用后，部分游离apo(a)仍与某些脂蛋白以 非二硫键形式结合，这种结合可被脯氨酸解离 脯氨酸可以解离Lp(a)与其他脂蛋白的非共价键结合 脯氨酸存在下BFC1.063ME(+)与 HDLCDCM之差与Lp(a)的关系 （r = -0.232, P0.05） 用ME使 Lp(a) 解离为游离apo(a)和Lp(a)[Lp(a-)] 用脯氨酸解离Lp(a)或apo(a)与脂蛋白的可能非共价键结合 1.063密度下超速离心，将HDL（BF1.063）与其他脂蛋白分离 1.006密度下超速离心，将HDL和LDL（BF1.006）与VLDL分离 用HPLC测定BFC1.006和BFC1.063 HDLC = BFC1.063 LD