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单亲灭活德氏乳杆菌和乳酸乳球菌原生质体融合条件优化-遗传
※生物工程 食品科学 2012, Vol. 33, No. 05 193
李 丽,房 杰,黄洁洁,付瑞燕*
(安徽农业大学茶与食品科技学院,安徽 合肥 230036)
利用单亲灭活原生质体技术对德氏乳杆菌 FQ 菌株和乳酸乳球菌 FL 菌株的原生质体进行融合,考察原生质
体制备、再生和融合条件的影响因素。结果表明:制备德氏乳杆菌 FQ 菌株原生质体最适条件为温度 37 ℃,在含
有 10μg/mL 变溶菌素和 1mg/mL 溶菌酶溶液中超声处理 90min 。在此条件下,原生质体再生率可达6.36% 。乳酸乳
球菌 FL 菌株添加 1mg/mL 甘氨酸处理后,用 10mg/mL 溶菌酶 37 ℃恒温酶解90min,原生质体形成率可达99.97% 。
65℃处理乳酸乳球菌FL 菌株原生质体 120min,原生质体灭活率可达96.89% 。融合实验结果表明,在PEG6000 400g/L
(含 0.02mol/L MgCl2 和 0.01mol/L CaCl2) 、融合时间5min 、融合温度20 ℃、pH6.5 的条件下促融,德氏乳杆菌FQ
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菌株和乳酸乳球菌 FL 菌株原生质体的融合率可达 2.72 ×10 。
单亲灭活;德氏乳杆菌;乳酸乳球菌;原生质体融合
Optimization of Conditions for Protoplast Fusion between Single Inactivated Lactobacillus delbrueckii and Lactococcus lactis
LI Li ,FANG Jie ,HUANG Jie-jie ,FU Rui-yan*
(College of Tea Food Science and Technology, Anhui Agricultural University, Hefei 230036, China)
Abstract :Single inactivated protoplast fusion technique was used for the fusion of Lactobacillus delbrueckii FQ with
Lactococcus lactis FL. The protoplast formation, regeneration and fusion conditions were examined in this study. Results showed
that the optimal enzymolysis conditions for L. delbrueckii FQ were ultrasound treatment for 90 min at 37 ℃ in the presence of
10 μg/mL mutanolysin and 1 mg/mL lysozyme. Under these conditions, the protoplast regeneration rate reached 6.36%. The
protoplast formation rate of L. lactis FL was up to 99.97% after 90 min of treatment with 10 mg/mL lysozyme in the presence
of 1 mg/mL glycine. L. lactis FL protoplasts showed an inactivated rate of 96.89% after 120 min of exposure to 65 ℃. The fusion
rate between Lactobacillus delbrueckii FQ
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