(甘博士)分子伴侣在胰岛素生产中的应用.pptVIP

* 2003年中国市场人胰岛素不同类别制剂市场份额（％） 2003 IMS data * 2003年上海市场人胰岛素不同类别制剂市场份额（％） 2003 IMS data * 2003年北京市场人胰岛素不同类别制剂市场份额（％） 2003 IMS data * 2003年底美国市场人胰岛素不同类别制剂市场份额 Primary care physician 32.0% 23.0% 20.5% 26.0% * * * * * 谢谢！ 感谢聆听！ THANK YOU FOR WATCHING! 演示结束！ * 分子伴侣理论在制造胰岛素中的应用 甘李药业有限公司 甘忠如博士 * 主要内容 胰岛素的生产 胰岛素的质量控制 探讨 * 胰岛素制造的历史进展 年代 胰岛素种类 主要分离纯化方法 胰岛素纯度 20年代至40年代 动物胰岛素 结晶和重结晶 约80% 50年代至70年代 动物胰岛素 常规层析法 离子交换层析 分子筛 约95% 80年代至90年代 重组人胰岛素 生产型高效液相层析（HPLC）应用于胰岛素纯化 99% 90年代末至今 胰岛素类似物 表达系统的改进 分子伴侣应用于胰岛素生产 99% 将来 吸入胰岛素、开发胰岛素、基因治疗…… * 重组人胰岛素表达方法的进展 80年代初，A、B链分别表达，分别纯化 80年代末：胰岛素原法 90年代：分子伴侣理论的应用 * S S S S S S CNBr切开 纯化 表达 表达 CNBr切开 纯化 复性 保护肽 保护肽 A链 A链 B链 B链 B链 A链 A、B链分别表达法 * 胰岛素原法 表达 CNBr切开 纯化 复性 酶切 纯化 A链 B链 C肽 保护肽 * 胰岛素原法的缺点 工艺复杂 复性率低：人胰岛素原有6个巯基要形成3个二硫键，有15种可能的组合，其中只有一种构象具有活性 * 人体内胰岛素表达图示 DNA mRNA A链 B链 C肽 分子伴侣 复性 表达 翻译 酶切 分子伴侣(Molecular Chaperone) 分 子 伴 侣: 是一类蛋白质,其功能是帮助新合成 的蛋白质形成正确的二硫键及正确的 构象。(全过程称为蛋白质复性) 分子伴侣分为: 分子间伴侣和分子内伴侣； 二 者 区 别: 分子间伴侣和被复性的蛋白质没有化 学键连接;而分子内伴侣则是和被复性 的蛋白质通过共价键连在一起,待复性 完毕后再切开。 SH SH SH SH 甘李药业分子内伴侣理论在胰岛素生产中的应用 复 性 S S S S S S B链 A链 融合蛋白 酶 切 SH SH A链 B链 分子内伴侣 分子内伴侣 S S S S S S 胰岛素类似物 或胰岛素 分子内伴侣 酶 切 纯 化 S S S S S S B链 A链 B链 A链 分子内伴侣在胰岛素和类似物生产中的作用 保护胰岛素在大肠杆菌内不被分解 提高胰岛素表达量 提高复性收率 简化胰岛素和类似物的生产步骤 * 甘李公司生产工艺和国外公司的比较 胰岛素原粗品 胰岛素纯品 胰岛素粗品 还原和氧化 纯化 酶切,解离A、B链 胰岛素原纯品 纯化 胰岛原融合蛋白 无序胰岛素原 胰岛素原（SSO3)6粗品 胰岛素原（SSO3)6纯品 发酵 裂解,去除保护多肽 亚硫基化 粗品纯化 国外公司工艺 无C肽胰岛素原融合蛋白 发酵 正确构象无C肽胰岛原纯品 胰岛素粗品 胰岛素纯品 复性 酶切,解离A、B链 纯化 甘李公司工艺 正确构象无C肽胰岛原粗品 纯化 共31步 共17步 * Drug Biotechnology Regulation edited by Yuan-yuan H. Chiu, John L. Gueriguian P221-262 Production-Scale Purification Processes Walter F. Prouty Lilly Research Laboratories, Eli Lilly and Company, Indianapolis, Indiana 引自 * * 判别胰岛素质量的标准 通用标准（药典标准） 纯度标准－胰岛素制造过程中的金标准 项目/标准依据 欧洲药典标准 美国药典标准 甘李公司标准 相关物质 不得过2.0%(包含A21) 不得过2