猪链球菌2型溶血素5Zy基因的表达及其产物的纯化和活性研究－.PDFVIP

1198 -实验室研究· 猪链球菌2型溶血素5Zy基因的表达 及其产物的纯化和活性研究 刘丽娜 胡福泉朱军民赵岩 潘渠李明 唐家琪 【摘要】目的克隆并表达猪链球菌2型(ss2)溶血素基因(s如)，为筛选ss2疫苗保护性抗原 奠定基础。方法用PcR方法从ss2临床分离株05zYH33的基因组DNA中扩增出溶血素基因片 段．将目的基因插入表达载体pET_30b(+)中，构建重组表达载体pET30bs■。重组载休经限制性内 切酶酶切和DNA测序鉴定后，转化大肠埃希菌(Ec以Rosctta)。lPl、G诱导表达，镍离子亲和层析 纯化重组蛋白，鉴定目的蛋白的免疫学活性以及溶血活件。结果PcR扩增的，“基因长度约为 1500 bp，经测序分析，插入载体的出，基因序列准确并保持，正确的读框。经IPTG诱导的目的蛋白 表达甓约占总蛋白的30％，亲和层析纯化后，蛋白纯度达80％以}。westernblot检测址实该蛋白能 与感染sS2的人血清发生特异性结合。溶血试验表明重组蛋白溶血索能使猪红细胞发生溶解，溶血 价为256。结论成功构建了表达载体pET30b—s0，该载体可在人肠埃希菌中表达，表达蛋白具有免 疫反应原性及溶血活性。