生物指示剂耐受性检查法指导原则新增.pdfVIP

第二次征求意见稿 生物指示剂耐受性检查法指导原则 （新增） 生物指示剂的耐受性是指其所含的微生物能够耐受各种灭菌程序的能力。一 般来说，生物指示剂的耐受性用D 值来表示。D 值是指将生物指示剂中的微生物 杀灭90%所需的灭菌时间或灭菌剂量。生物指示剂的主要质量参数包括总芽胞数、 D 值和存活时间、杀灭时间。 本指导原则用于指导生物指示剂的耐受性以及相关质量参数的测定，也可用 于生产过程污染微生物的耐受性测定。 总芽胞计数 培养基 芽胞计数可用胰酪大豆胨琼脂培养基或其它适宜的培养基。胰酪大豆胨琼脂 培养基照无菌检查法（通则1101）制备，其它培养基照生物指示剂使用说明书 进行制备。芽胞计数用培养基应进行培养基适用性检查。 稀释液 灭菌纯化水（或其他经过验证的无菌溶液） 芽胞悬液制备 芽胞悬液制备方法如下，如果下列方法经确认不适用，应建立其他适宜的方 法。 根据生物指示剂的载体和初级包装情况，采取适宜的制备方法将载体上的细 菌芽胞充分洗脱并混悬于稀释液中。 （1） 液体芽胞悬液生物指示剂 将芽胞悬液生物指示剂样品充分混匀后，或经过超声处理后，取1ml，用稀 释液制成1:10 的供试液。 （2）纸质载体生物指示剂或自含式生物指示剂 取不少于34 个最小单位生物指示剂，将纸片载体从初级包装中取出，置适 量的稀释液中，采用搅拌、涡旋或其它适当的方式，使容器里的纸片成纤维状（建 议至少需要15 分钟的浸泡和搅拌以使芽胞能充分回收），充分混合制成均一的混 悬液。 1 第二次征求意见稿 （3）非纸质载体的生物指示剂 取不少于3 个最小单位的生物指示剂，将载体从初级包装中取出，置适量的 稀释液中，可采用超声波(振荡器)反复振摇，或其他适宜的方法将载体上的芽胞 充分分散于稀释液中。 热激活 取上述制备的芽胞悬液10ml，置灭菌试管中，按照表1 的要求进行热激活 处理，时间达到后将芽胞悬液转移至0～4℃的冰水浴中迅速冷却至室温。 培养和计数 取上述经热激活的芽胞悬液，用灭菌纯化水进行10 倍系列稀释，采用倾注 法和涂布法进行芽胞计数。 倾注法即取芽胞数在30～300 cfu/ 皿ml 稀释级的芽胞悬液1ml，置直径 90mm 的无菌平皿中, 注入15～20ml温度不超过45℃熔化的胰酪大豆胨琼脂培养 基，混匀，凝固，倒置培养，；涂布法即取15～20ml 温度不超过45℃的胰酪大 豆胨琼脂培养基，注入直径 90mm 的无菌平皿，凝固，制成平板，采用适宜的 方法使培养基表面干燥，每一平皿表面接种芽胞数在30～300 cfu/ ml 稀释级 的芽胞悬液不少于0.1ml。每稀释级至少制备2 个平板。 按照表1 的推荐的培养温度和培养时间培养。每稀释级每种培养基至少制备 2 个平板。逐日点计和记录各平板的菌落数，并计算每个最小单位生物指示剂的 平均芽胞数。 结果判定 生物指示剂的总芽胞数一般为标示值的50%～300%。 2 第二次征求意见稿 3 第二次征求意见稿 表1 生物指示剂的芽胞计数的试验条件 生物指示剂的种类 热激活参数 培养条件* 时间（分 培养基 灭菌方式 所含菌种 温度（℃）