第13章-生物药物的分析n.pptVIP

TYUI 第一节 概述 第二节 鉴别反应 第三节 杂质检查 1、结构确证研究 1.1关于氨基酸序列研究 多采用固相合成，合成工艺不能独立作为一项结构确证性研究 可以采用的方法：Edman、MS/MS、NMR等 对于序列较长的情况可以用内切酶裂解后分析小片段的序列 肽图分析 1、结构确证研究 1.2短肽与长肽的划分 尚无定论 1.3空间结构研究 一些长肽需要具有一定的空间结构才能发挥活性，应开展空间结构研究， 分析方法：X-Ray、NMR、拉曼光谱、红外、圆二色等 2、质量研究 2.1质量研究项目 结合一般化学药物的研究思路与合成多肽的结构特征进行 一般包括： 外观性状、理化常数（等电点、溶解性等）、鉴别、氨基酸组成分析、水分、反离子含量、纯度、有机溶剂和反应试剂残留量、生物安全性检查、含量或活性效价测定等 2、质量研究 2.2 有关物质研究 合成多肽药物有关物质的特点和研究难点 工艺杂质（缺失肽、断裂肽、氧化肽、二硫键交换等） 降解产物及聚合物 （脱酰胺、氧化、水解、二硫键错配、消旋、beta消除、聚集等） 有关物质研究关注点 同时采用不同原理的研究方法（反相HPLC、分子排阻、CE，SDS及激光散射等） 反相HPLC要采用梯度洗脱方式 专属性验证 2、质量研究 2.3 生物安全性检查 争论较大、具体情况具体分析 2.4关于活性研究 方法的建立和验证很困难，专属性难以保证。 第四节 含量（效价）测定 JILIN UNIVERSITY COLLEGE OF LIFE SCIENCE * 概述 鉴别实验 杂质检测 含量（效价）测定 生物制品 第13章 生物制品分析概论 生物药物（biopharmaceutics或biopharmaceuticals）是利用生物体、生物组织或器官等成分，综合运用生物学、生物化学等学科的原理与方法制得的天然生物活性物质以及人工合成或半合成的天然物质类似物。 生物药物主要包括生化药物（biochemical drugs）、生物技术药物（bio-technology drugs)和生物制品（biological products)等。 生物制品种类与特点 生物制品种类疫苗类抗毒素及抗血清血液制品重组DNA制品诊断制品其他制品 疫苗类细菌类疫苗病毒类疫苗联合疫苗双价疫苗及多价疫苗 生物制品种类与特点 生物制品特点分子量大不是定值生化法结构确证需检查生物活性要求安全性检查需做效价测定 理化鉴别法 化学法 紫外分光光度法 高效液相色谱法 生化鉴别法 酶法 电泳法 生物鉴别法 血清学法 生物学法 特殊杂质检查 宿主细胞蛋白残留量 外源性DNA残留量 产品相关杂质 残余抗生素 安全性检查 无菌 热源 细菌内毒素 异常毒性与特异性毒性 过敏反应 合成多肽类药物 氨基酸分析（证明多肽的组成是否正确）； 质谱测定（提供相对分子质量及序列的信息）； 序列分析以及肽图测绘等； 紫外：对具有生色团结构的小肽有一定的测试意义； 红外：适用于小肽（含三个氨基酸的肽）、拟肽等； 核磁共振：可对小肽的结构提供部分信息； 其他方法： HPLC、比旋度测定等。 ——GH_peptides T10 T8 T4 T3 T1 T12 T13 T14 T2 T7 T9 T15 T20-T21 T18-19 T17-T18-19 T6-16 T11 注意点： 仿制药物：相关物质大于或等于0.1%，要进行结构确证（注意响应因子） 创新药物：除了与仿制药物一样之外，尽可能多的罗列所有可能杂质，要与中间体关联，特别注意手性问题！ 单体 二聚体 min 24 25 26 27 28 29 30 mAU 0 200 400 600 800 1000 1200 VWD1 A, Wavelength=214 nm (TA1\TA12009-10-19 18-36-33\20091019000028.D) 25.165 25.666 26.064 26.456 27.072 27.572 28.251 1 2 3 4 5 6 7 Thymosin a1 胸腺素a1样品37度放置稳定性结果 峰 1~5 和主峰分子量完全相同 3065.6 峰 6、7 分子量完全相同 3047.4 NH2-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu – Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-OH D-Asp b-D-Asp L