DNA和RNA提取原理和方法.pdfVIP

主讲人：刘召华 唐维 （修改） : DNA诅 ＿ : DNA 、 ＿ -- : RNA 一口 : RNA 核酸是遗传信息的载体，是最重要的生物 信息分子，是分子生物学研究的主要对象，因 此核酸的提取是分子生物学实验技术中最重要、 最基本的操作。 : DNA诅 ＿ : DNA 、 ＿ -- : RNA 一口 : RNA T心心W咚 1 D 基因组DNA的提取 CTAB法 SDS法 其它 D 非基因组DNA 的提取 户 质 粒 DNA 的提取 ·碱裂解法 • 煮沸法 户 线粒体、叶绿体DNA 的提取 ·差速离心结合SDS裂解法 D CTAB法 原 理 （植物DNA 提取经典方法） CTA B C h e x a d ec y l t r i m e t h y l a m m o n i u m b r o m i d e , 十六烧基三 甲基 淏化 铣 ）， 是一种阳离子去污剂， 可 溶解细胞膜， 并与核酸形成复合 物。 具有从低离子强度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性，在这种条 件下，蛋 白质和中性多聚糖仍留在溶液里 该复合物在高盐溶液中 C0.7mol/L NaCl ) 是可溶的， 通过有机溶剂 抽提，去除蛋 白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离 出来。 注： C T A B溶液在低于15°C 时会形成沉淀析出， 因此在将其加入冰冷的 植物材料之前必须预热， 且离心时温度不要低于15°C。 D CTA B提取缓冲液的经典配方 Tris-HCI C EDTA C 组份 NaCl CTAB P-琉基 乙醇 p HS.O) p HS.O) 0.1% CV/V) 终浓度 100 mM 2 0 m M 1.4M 2%(W N) 使用前加入 Tris-HCI C p H S.O) 提供一个缓冲环境，防 止核酸被破坏； EDTA赘合Mg2+或Mn2+离子， 抑制DNase活性； NaCl 提供一个高盐环境， 使DNP C脱氧核糖核蛋白 ）。CTA B溶解细胞膜，