单基因疾病分子诊断(教材).pptVIP

1.点突变 点突变：DNA分子中单个碱基的替换 终止密码子突变： 点突变导致提前产生终止密码，或终止密码突变而编码一个氨基酸使肽链延长 一、单基因遗传性疾病的基因诊断 一、单基因遗传性疾病的基因诊断 各种点突变所造成的后果： 蛋白质分子量改变 蛋白质合成量下降 无蛋白质合成 2.片段性突变 核苷酸的丢失和增多 缺失：基因中碱基（遗传物质）的丢失 插入：外来基因片段插入某一基因序列中 倍增：基因内部某一段序列发生重复 一、单基因遗传性疾病的基因诊断 3.动态性突变 以三核苷酸为单位的重复序列，在传递过程中不稳定，会发生扩展，即子代的重复次数往往较亲代大为增加，因此又称动态性突变。 脆性X综合征：CGG重复。 少年脊髓型共济失调：GAA重复。 …… 一、单基因遗传性疾病的基因诊断 一、单基因遗传性疾病的基因诊断 （二）遗传性疾病基因诊断的策略 1.直接诊断策略 2.间接诊断策略 （二）遗传性疾病基因诊断的策略 1.直接诊断策略 基因诊断的直接策略就是通过各种分子生物学技术检测基因的遗传缺陷，因此直接诊断的前提是被检测基因的正常序列和结构必须被阐明。 直接诊断是直接揭示遗传缺陷，因而比较可靠。 一、单基因遗传性疾病的基因诊断 2.间接诊断策略 间接诊断的实质是在家系中进行连锁分析，通 过分析可确定个体是否存在双亲同源染色体中 的致病染色体 间接诊断不是寻找DNA的遗传缺陷，而是通过 分析DNA的遗传标志的多态性估计被检者患病的 可能性 一、单基因遗传性疾病的基因诊断 连锁分析(linkage analysis): 是通过用一系列覆盖密度适当的遗传标志在先证者家系中进行分析，从而找到与某一遗传标志紧密连锁的致病基因，并确定该基因在染色体上的位置 一、单基因遗传性疾病的基因诊断 （三）基因诊断所采用的技术 一、单基因遗传性疾病的基因诊断 2.基因表达异常的检测 3.间接诊断所采用的技术 1.直接诊断所采用的技术 1.直接诊断所采用的技术 Southern 印迹技术 多重PCR技术 PCR-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP） 等位基因特异性寡核苷酸（ASO） DNA芯片技术（DNA chip） 单链构象多态性（SSCP） 变性梯度凝胶电泳（DGGE） DNA序列分析（DNA sequencing） 一、单基因遗传性疾病的基因诊断 2.基因表达异常的检测 定量PCR技术 DNA结合染料技术 水解探针技术技术 杂交探针技术 一、单基因遗传性疾病的基因诊断 3.间接诊断所采用的技术 间接诊断就是分析DNA的遗传标志的多态性 （1）限制性片段长度多态性（RFLP） 第一代DNA的遗传标志，具双等位基因多态 性，所含信息量有限 。 检测方法：Southern印迹技术、PCR-RFLP。 一、单基因遗传性疾病的基因诊断 （2）小卫星序列 串联重复可变数目（VNTR），以 6～70bp 为单位，可重复数次至数十次，以串联形式排列，构成数量可变的串联重复序列。等位基因常常达10个以上，信息量比 RFLP大得多 。 检测方法：Southern 印迹技术、PCR技术 。 一、单基因遗传性疾病的基因诊断 一、单基因遗传性疾病的基因诊断 （3）微卫星序列 以 2～6bp 为单位，重复次数可达几十次，又称短串联重复序列(STR) ，在基因组中出现的数目和频率不同，分布广泛，具高度多态性，属于第二代的遗传学标志 。 检测方法：PCR技术、基因扫描 。 一、单基因遗传性疾病的基因诊断 （4）单核苷酸多态性(SNP) 第三代DNA的遗传标志，其多态性仅表现为单个核苷酸的变异，在人类基因组中的数目可达300万个，由3～4个相邻的标志便可构成8～16种单倍型，是一种信息量非常大的标志系统 。 检测方法：DNA芯片技术。 一、单基因遗传性疾病的基因诊断 一、单基因遗传性疾病的基因诊断 （四）遗传标志的选择 选择离致病基因最近的遗传标志 遗传标志离致病基因的距离越远，二者间发生重组的可能性越大，二者间距离为1cM(106bp)时，发生重组的概率为1% 一、单基因遗传性疾病的基因诊断 （五）间接诊断的不确定性 遗传标志所带的信息有限 新突变 基因重组 家系成员不够完整 一、单基因遗传性疾病的基因诊断 二、单基因病的分子诊断 单基因遗传病 是由于某一基因结构的变化或由其而引起的基因表达异常而导致的疾病