β2-微球蛋白检测试剂的研发及临床应用.pdfVIP

巫土刿型篮L一——————生坚畦 摘要 目的： 1．依据胶乳增强免疫比浊法的基本原理，研发出一种具有自我 知识产权的肚一微球蛋白(BMG)检测试剂，为临床提供一种诊断陀 能好、具有价格优势的试剂。 2应用研究的p：一徽球蛋自检测试剂检测糖尿病患者血清D：．微球 蛋白含量并评价其应用价值。 方法： l将大小均一的胶乳和碳化二距胺反应进行羧化，然后和商品 抗体共价结合，得到免疫微球。观察免疫微球和B：．微球蛋白的反应睛 况，确定制备p：一微球蛋白试剂的胶乳直径、碳化二亚胺用量、B：一微 球蛋白抗体用量、搅拌时间及PEG浓度的最佳条件．建立自制试剂在 日立7600分析系统下的最佳反应体系。并对成品试剂的批内、批问变 异、线性范Ⅲ、检}n|5醴、【n|收性能、抗干扰性、稳定性·H靖E进行评价。 取糖尿病病人24小时尿液以测定血清B：．微球蛋白、尿素、肌酐以及24 小时尿蛋白含量，每一实验参与者的血清B：．微球蛋白均使用自研试剂 褐北京剥德曼试剂进行溅定，依据24小时尿蛋白结果对糖尿病病人进 行分组，比较拜实验组皿消B，一儆球生rI、版索、肌卅水、F的差异，对 糖联病肾病患者血清D2一微球蛋白与尿素、肌酐、24小时尿蛋白量进行 相关性分析，并利用Roc曲线评价Bz-微球蛋白诊断糖尿病肾病的效 巫上望也址———————————————————————————』』i越 能，以探时糖尿痫患者Jf|L消p2一微球蛋白检测的临床意义c 结果： 1胶乳直径为125rtm，碳化二亚胺的最佳用量Jj8％(w／w)，最佳 搅拌对间Yj2d时，胶乳和抗体的最佳比例置J4：l(w／w)，PEG最佳浓 度20％。最佳加样量为3ul，试剂l自n样量为160pl，试剂2加样彰J40pl， 波长600nm，反应时间10分钟。低、巾、高二个不同浓度的批内cv 88％： 分别为350％、289％和268％；批间CV分别为339％、323％和3 线性范围为O～19 oo％～ 2mg／L：最低检测限为02mg／L：回收率，：J95 102 50％，平均回收率为98 98％；在血清中血红蛋白曼109几、胆红素 有显著性干扰；自研试剂和利德曼试剂的相关性为0998；试削于4—8。c 存放可稳定放置至少6个月，室温下能放置3周，37C至少可放置7天。 2桌用24小时尿蛋白作为分组依据，以24小时尿蛋白150mg／d 为界将糖尿病患者分为35例的单纯糖尿病组和i15N的糖尿病并肾损 害．人绀，精脓病并有蹲损害组再依据24dqlq尿蛋汀鞋分为24小时球 蛋白为1 3500mg／d的重度蛋白尿组(n-20)。 3正常对照组、单纯糖尿痫组、轻度蛋白尿组、中度蛋白尿组 94±0 89±238、 和晕度蛋白尿组血清尿素水、『’分刖为4 98、5．03±158、4 1342±504、2092：=9 30士 78mmol／L。血组血L清肌目}水半分别为84 2l70、7847：／：l873、807l±2523、17l 0l 34±163、430】6± 堕蔓出班丝———一———————卫童{自!L 183 71、162±083、 721nnol／L。五组血清队一微球蛋白水平分别为1．68±0 3．51：=0 81、6．71±112、8．46±1 85mg／L。可见糖尿病肾病中，轻度蛋 白尿组血清尿素、肌酐水平与正常对照组和单纯糖尿组差异没有统汁 学意义，中、重度蛋白尿组血清尿素、肌酐水平才与正常对照组、单 纯糖尿病组、轻度蛋白屎组差