几个小麦高矮杆品种中过氧化物酶和酯酶与株高的相关性严海燕1.PDF

几个小麦高矮杆品种中过氧化物酶和酯酶与株高的相关性 严海燕1 2 2 张开旺 徐乃瑜 1中国科学院武汉植物园 武昌，磨山 430074 2武汉大学生命科学院 武昌，珞珈山 摘要 我们采用不同发育时期的高、矮杆亲本与正反交杂种（F0 ）种子的酯酶(EST)、过氧化 物酶(POD)酶谱进行了比较研究，并对一些农艺性状之间的相关性进行了测定。结果表明不 同株高品种在拔节期节和节间组织的酯酶D 带、过氧化物酶的酶带着色强度和酶活与株高 呈显著负相关；在其他发育时期，这些同工酶酶谱和酶活未表现出相关性。此外芽鞘与株高 呈高度正相关（=0.9997 ），在拔节期茎的伸长速度与株高呈正相关，这对小麦矮化育种筛选 矮杆亲本和对杂交后代选拔优良矮杆单株提供一个早期能预测的简便方法。 关键词：过氧化物同工酶、酯酶同工酶、株高、拔节期、芽鞘 同工酶分析是一个强有力的工具，广泛应用于医学、生物学、分类学、病理学、遗传学、 育种学等领域。在植物方面，人们已把同工酶技术应用于发育生理、基因定位，在品种资源 研究方面，用于种间变异、地理分布及起源中心的探讨。酯酶和过氧化物酶是植物生长过程 中起重要作用的两类酶。小麦的株高不仅与抗倒伏有密切关系，也与生物产量及经济性状有 密切关系。因此探讨株高与过氧化物酶、酯酶同工酶酶谱的关系，在育种及基础研究方面都 有重要意义。本研究对不同株高品种及对高、矮杆亲本和杂交后代的酯酶、过氧化物酶酶谱 和酶活进行了分析，以期找出与株高相关的特异谱带，为育种提供生化鉴别指标。 1 材料和方法 材料：矮杆：矮苏二号、矮杨三号、矮变一号、Oleson 高杆：苏麦三号、鄂麦6 号 中杆：杨麦三号 杂交亲本：矮变一号、鄂麦6 号 及其F0 代杂种 田间工作： 所有材料于11 月11 日在田间播种， 22 日出苗。株距5cm,行距25 cm 。分别在拔节期、 乳熟期、完熟期取材制样。 样品制备： 萌动胚：每品种取60 粒，在 17°C 温箱内浸种24h 。取露白种子切胚制样，每10 粒种胚 加蒸馏水0.5ml 室温下研磨，经3500rpm 离心20 分钟，取上清液，按1：1 加10%甘油，于 -10°C 冰箱中保存。 芽鞘：每品种取80 粒，于20°C 温箱内浸种萌发。第一片真叶即将露头时切取芽鞘制样。 按每10 个芽鞘加蒸馏水0.4ml 研磨制样，方法同上。测量20 株芽鞘的长度求其平均值。 节和节间：田间材料拔节期，取茎长9-20cm 的植株节和节间制样。统计20 株茎长。按每 克加3ml 蒸馏水制样，方法同上。 完熟种子：取完熟期种子，每10 粒种子加蒸馏水1ml 研磨制样，方法同上。 同工酶检测和酶活测定方法： 本实验采用的同工酶分析分离法均为聚丙烯酰胺凝胶垂直薄板电泳。酯酶采用的缓冲系统 为低离子强度的Tris-柠檬酸缓冲系统（.pH8.9），凝胶浓度下层胶为7.3%，上层胶为2.5% ， 电极缓冲系统为低离子强度的Tris-Gly 系统（pH 8.7 ）。每样槽点样80μl 和1 滴溴酚蓝。电 泳电压为200-260v/每板，时间3~4 小时。染色用 1mg/ml 的醋酸-α-奈酯加 1mg/ml 的坚牢 1 email: haiyan@rose.whiob.ac.cn 蓝（RR 盐）,在染液中37°C 染色10~15 分钟，即可出现棕色酶带。 过氧化物酶采用Tris-HCl缓冲系统下层胶浓度为7%（pH 8.8 ）, 上层胶浓度为4% （pH 6.8 ）。 电极缓冲液系统为高离子强度的Tris-gly系统（pH 8.8 ）。每样槽点样80μl和1 滴溴酚蓝。电 泳电压为每板 100~200v，稳压电泳。电泳时间11~18h。 染色采用 1mg/ml的联苯胺加少量 的30%H O (1.0g+ 9 ml 冰醋酸+dH O 40 ml + 0.3%H O 50 ml ) ，室温下染色半分钟到一分 2 2 2 2 2 钟，看到酶带显兰色，即取出放入流水中冲洗过夜，酶带渐变成亮棕色。 过氧化物酶酶活测定:反应液由2.5ml pH 5.0 柠檬酸缓冲液，0.25 ml 3%H O , 0.25 ml 2%邻