课件：病原微生物检查.pptVIP

* * * 病原微生物检查 Exercise ten 制作者：黄海婵（hhc@zjut.edu.cn） Tel:0571or 0571 目的要求 实验材料 实验程序 实验报告 思考题 细菌学检查 目的要求 了解大肠菌群作卫生指标原因及检测原理、菌种鉴定原理。 正确测定食品中细菌总数和大肠菌群数，会从EMB平板上区分大肠菌群 。 了解食品中和食物中毒样品中沙门氏菌的检验 菌落总数：指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。 判定样品被污染程度的标志 大肠菌群：指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。 食品中大肠菌群数系以100ml（g）检样内大肠菌群最可能数（MPN)表示。 沙门氏菌属（Salmonella）:是一大群寄生于人类和动物肠道内生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌统称为沙门氏杆菌。 1880年Eberth首先发现伤寒杆菌，1885年Salmon分离到猪霍乱杆菌，由于Salmon发现本属细菌的时间较早，在研究中的贡献较大，遂定名为沙门氏菌属。此菌可引起禽伤寒、鸡白痢、猪霍乱、鼠伤寒沙门氏菌、猪副伤寒、马流产沙门氏菌等疾病。 致病性最强的是猪霍乱沙门氏菌(Salmonellacholerae)，其次是鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)和肠炎沙门氏菌(Salmonellaenteritidis)。 实验材料 样品：水样、饮料、药物、鸡蛋、乳类等 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 伊红美兰培养基（EMB平板） 单倍乳糖蛋白胨培养基 6支/每组 双倍乳糖蛋白胨培养基 3支/每组 100ml氯化镁孔雀绿增菌液 DHL平板 其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、记号笔、 接种环、试管架、酒精灯、火柴、标签纸、 实验程序 Ⅰ：样品中细菌总数检查 Ⅱ: 样品中大肠菌群的检测 Ⅲ：样品中沙门氏菌的检验 实验程序Ⅰ——样品中细菌总数检查 检样 做成几个适当倍数的稀释液 选择2~3个稀释度，各以1mL分别加入灭菌平皿内 每皿内加入适量营养琼脂 菌落计数 报告 实验程序Ⅱ——样品中大肠菌群的检测 德汉氏小管 发酵培养基：含蛋白胨、溴甲酚紫和糖 产酸使培养基变黄 产酸使培养基变黄 德汉氏小管中有气体证明产气 EMB平板上的大肠杆菌典型菌落 实验程序Ⅲ——食品中沙门氏菌的检验 检样 增菌培养 选择性平板分离纯化 生化试验 血清学技术提供了培养物菌种的鉴定 实验报告 （一）、增菌培养 冻肉、蛋品，乳品及其它加工食品首先需要进行前增菌。 1、取样25g (m1)，加入225ml缓冲蛋白胨水中。固体食品可先用均质器以8000～10000转／分打碎1分钟，或用乳钵加灭菌砂磨碎；粉状食品用灭菌匙或玻璃棒研磨使其乳化。 2、36+1℃培养4小时，移取10ml接种于100ml氯化镁孔雀绿增菌液或四硫磺酸钠煌绿增菌液内，于42C培养18～24小时。同时，另取10ml，加入于100ml亚硒酸盐胱氨酸增菌液内，于36+1℃培养18～24小时。 鲜肉，鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品不必经过前增菌，各取25g(m1)加入灭菌生理盐水25ml按上述方法做成匀浆，取其半量接种于100ml氯化镁孔雀绿增菌液或四硫磺酸钠煌绿增菌液内，于42C培养18～24小时；另一半量接种于100ml亚硒酸盐胱氨酸增菌液内，于36+1℃培养18—24小时。 （二）、分离培养 用铂金耳取一环增菌液分别划线接种于： 亚硫酸铋琼脂平板(BS)和DHL琼脂平板(或HE琼脂平板、SS琼脂平板)各一个，于36+1℃分别培养18—24小时(DHL、HE、SS)或40—48小时(BS)。观察各个平板上生长的菌落，沙门氏菌属亚属工、Ⅱ、Ⅳ、V和Ⅲ型在各个平板上的菌落特征见表5-4。 （三）、生化试验 挑取选择性琼脂平板上的可疑菌落，接种于三糖铁琼脂培养基中。在三糖铁琼脂内，各菌属的主要反应结果如表5—5。 表5—5说明在三糖铁琼脂内