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第 卷第 期 南昌大学学报（理科版）
３８ ３ Ｖｏｌ．３８ Ｎｏ．３
年 月 （ ） Ｊｕｎ．２０ １ ４
２０ １ ４ ６ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎａｎｃｈａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ
文章编号： （ ）
１ ００６０４６４ ２０ １ ４ ０３０２３４０９
类人胰岛素原多拷贝重复基因原核
表达载体的构建与表达
，
１ ２ １ １
罗联忠 ，陈仲巍 ，叶子坚
（ 厦门医学高等专科学校药学系； 厦门大学海洋与地球学院，福建厦门 ）
１ ． ２ ． ３ ６ １ ００８
摘 ：根据大肠杆菌密码子偏好性，优化人胰岛素原基因序列，同时用 个赖氨酸取代 链。重叠 扩增法
２ Ｃ ＰＣＲ
克隆优化的类人胰岛素原基因， 扩增引物中引入胰蛋白酶酶切位点和核酸限制性内切酶识别位点。经酶切、
ＰＣＲ
拼接获得类人胰岛素原多拷贝基因，并构建人胰岛素原基因多拷贝原核表达载体，转化感受态大肠杆菌诱导表达
融合蛋白。表达产物经 电泳，考马斯亮兰染色和融合蛋白染色条带光密度分析表明，含有 拷贝的类
ＳＤＳＰＡＧＥ ４
人胰岛素原重复基因序列原核表达载体的诱导表达类人胰岛素原效率最高，是单拷贝类人胰岛素基因原核表达载
体表达效率的 ３ 倍左右。表达产物经质谱鉴定，确定为优化设计的类人胰岛素原，表明构建的多拷贝类人胰岛素
原基因表达载体可应用于后续人胰岛素原的高效表达生产研究。
关键词：类人胰岛素原；重组基因表达；多拷贝基因；原核表达；糖尿病
中图分类号： 文献标志码：
Ｑ３４３ Ａ
Ｃｌｏｎｉｎ ａｎｄ ｒｏｋａｒ ｏｔｉｃ ｅｘ ｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ
ｇ ｐ ｙ ｐ
ｍｕｌｔｉｃｏｐｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｐｒｏｉｎｓｕｌｉｎｌｉｋｅ ｇｅｎｅ
，
１ ２ １
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