产纤溶酶菌种的鉴定及纤溶酶的分离纯化.PDFVIP

华南理工大学学报(自然科学版) Joumal of South China University of Technology Vol. 35 No.4 第 35 卷第4 期 2007 年4 月 (Natural Science Edition) April 2007 文章编号: 1000-565X(2007)04-0091-04 产纤溶酶菌种的鉴定及纤溶酶的分离纯化* 范晓丹郭勇刘柳 (华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510640) 摘 要:为了获得纯纤溶酶并探讨其酶学性质，从广泛收集的豆豆支中筛选到一株具有高 产纤溶酶能力的菌株，经鉴定为枯草芽抱杆菌.将该菌突变株 DC-12N8 的发酵液经离心 除菌、硫酸住分级沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow 和 CM-Sepharose Fast Flow 离子交换层 析、Sephadex G-75 凝肢过滤，获得电泳纯的豆豆支纤溶酶，每升发酵液可得到 4.5mg 活性酶 蛋白，每克酶蛋白活力达1. 18 moVs ，纯度为友酵原液的 53.6 倍，回收率为 1 1. 7%. SDS- 聚丙烯眈牍凝肢电泳表明，该酶是羊链蛋白质，其分子质量约为 28ku. 关键词:纤溶酶;鉴定;纯化 中图分类号: Q814 文献标识码:A 命名为纳豆激酶(NK) ，它是由纳豆杆菌发酵产生 血栓栓塞性疾病是当前死亡率最高的疾病之 的.国内外学者对 NK 的生理生化性质进行了一系 一.目前治疗血栓栓塞性疾病最为有效并且可靠的 列深入的研究，发现 NK 溶栓作用强，静脉给药和口 手段是溶栓疗法.因此，世界各国都致力于溶栓药物 服的效果都很好，因此被认为是一种很有潜力的新 的研究开发.现行临床所用的溶栓剂主要是链激酶、 型溶栓药物[3-4J 豆鼓是我国传统的大豆发酵食品， 尿激酶、葡激酶、人组织性纤维蛋白溶解酶原激活剂 ( t-PA) 等，但链激酶、尿激酶都有较大的副作用; 经研究[5 J 发现，豆鼓中也存在纤恪酶，且其酶活性 更高.该酶不仅血栓溶解能力强，而且无毒副作用， t-PA虽与血栓基质纤维蛋白有较强的特异亲和力， 不引起内出血，在体内半衰期长，无论作为抗血栓药 能在血栓局部高效地激活纤溶系统，但它在血液中 物还是预防血栓栓塞疾病的保健食品，都具有十分 半衰期很短，而且血浆中的纤溶酶原激活剂的抑制 重要的开发价值. 剂可快速抑制其活性.葡激酶对纤维蛋白也有很强 筛选溶栓酶产生菌并通过基因工程技术对其进 的特异性，但由于产率低且该菌本身的致病性，限制 行改造，是获得溶栓药物的最佳途径.本研究从广泛 了它的应用.目前国际上已采用基因工程的方法对 收集的的豆鼓中筛选到一株具有高产纤溶酶能力的 t-PA进行改造并生产出第三代溶栓药物一一-t-PA 的