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HMGA2在胃癌组织中的表达及意义 陈家庄1赖铭裕2 （通讯作者）韦丽秀1梁志海2 （1南宁市广西医科大学53002 1） （2广西医科大学第一附属医院消化内科530021） 【摘要】目的：探讨高迁移率蛋白H MGA2在胃癌组织、癌旁组织、正常胃黏 膜组织中的表达及其意义。方法：采用RT-PCR及SP免疫组化法检测50例 胃癌组织及对应的癌旁组织、正常胃黏膜组织中的H MGA2的表达，与临床资 料做统计学分析。结果：在胃癌组织中H MGA2mRNA有68.0% （34/50）呈 高表达，HMGA2在胃癌组织和癌旁组织、正常胃黏膜组织中的表达存在显著 性差异（Plt;0.01）, HMGA2的表达与和胃癌患者淋巴结转移及临床分期有相 关性（均Plt;0.05）o结论：HMGA2在胃癌中呈过度表达，可能成为胃癌诊断 及良恶性鉴别诊断指标之一。 【关键词】高迁移率蛋白A2胃癌逆转录?聚合酶链反应免疫组化 【中图分类号1R730.23【文献标识码】A【文章编号12095-1752（2012）07-0057-03 胃癌是人类常见的恶性肿瘤，居全球肿瘤发病和癌症死亡率的第二位 o尽管近年来对胃癌的研究取得了进展，但大多数患者有临床症状时都己处 于晚期并出现远处转移。HMGA2是近年来研究的热点癌基因之一，其属于高迁 移率蛋白A家族中的一员，含有3个AT ■钩结构与和1个酸性C末端oHMGA2 蛋白是一种非组蛋白染色体蛋白，木身缺乏转录活性，但能通过与染色质结合而 改变其结构，或者直接与相关蛋白结合发牛作用，继而调节其他基因的转录[2]。 研究表明HMG A2蛋白的表达参与人类多种肿瘤的发牛，如肺癌、卵巢癌、大 肠癌、胰腺癌、脂肪瘤等。木实验通过采用RT-PCR及SP免疫组化法检测50例 胃癌组织及对应的癌旁组织、正常胃黏膜组织中的HMGA2的表达，同时分析患 者的发病年龄、肿瘤大小，临床分期，淋巴转移等情况，进而探讨HMGA2与胃 癌的关系。 1材料与方法 1.1材料 选取广西医科大学第一附属医院2009年9月至2010年9 月接受胃大部切除术的胃癌标本50例，均经组织病理学检查证实，所有标本术 前均未接受非笛体抗炎药治疗及放化疗。男38例，女12例，年龄28?71岁， 中位年龄52.7岁。其中高分化、中分化癌17例，低分化、未分化癌33例，未 侵及浆膜者19例，侵及浆膜者31例，发生局部淋巴结转移者26例，无局部 淋巴结转移者24例，TNM分期：I、II期共28例，III、IV期共22例。同吋 取距癌缘5cm的癌旁组织50例，正常胃黏膜组织50例作为对照组。Tr i z o I 试剂盒，逆转录试剂盒均购自上海生物工程科技公司；2times;Taq PCRMasterMix 购自北京天根生化科技有限公司；试剂采用兔抗人HMGA2多克隆抗体，购自北 京博奥森生物技术有限公司，SP试剂盒，DAB显色试剂盒均购自福州迈新生 物科技公司。 1.2方法 1.2.1 PT-PCR法将胃癌组织、癌旁组织及正常胃粘膜组织约100mg用 Trizol法提取总RNA,用紫外分光光度计在260和280nm处测吸光O D值，计 算RNA含量和纯度。按cDNA逆转录酶试剂盒说明书进行操作，取3mu;g RNA逆转录为cDNA,以cDNA为模板进行PCR扩增? PCR引物由上海生物工 程科技公司合成。HMG A2上游弓|物序：5-CGAAAGGTGCTGGGCAGCTCCGG-3；下 游引物序列：5?CCATTTCCTAGGTCTGCCTCTTG-3，产物长度为323bp。内参GAPDH上 游引物序列：5-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3,下游引物序列： 5-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3,产物长度 401bp。反应条件：第一步，95°C预变 性5 min；第二步，94°C变性40s、58°C退火40s、72°C延伸40s,共30个循环； 第三步，72°C延伸10 mino反应体系共25mu;L。取PCR扩增产物行2%琼脂 糖凝胶电泳（含核酸染料），用凝胶分析仪照相分析。以（S的条带的灰度值■背 景灰度值）/（内参灰度值?背景灰度值）的值表示HMGA2mRNA的相对表达量。 1.2.2免疫组织化学法 所有标本均经10%甲醛固定常规脱水、透明、 渗蜡、包埋4mu; m厚连续切片，常规脱蜡、水化，采用免疫组织化染色超敏 两步法(SP染色)QAB显色，苏木素复染，吹干，具体操作按SP试剂盒说明书进 行，阴性对照采用生理盐水磷酸盐缓冲液PBS代替一抗。HMGA2以胞浆或胞 核岀现棕黄色颗粒为阳性表达。应用全自动图像分析仪，lmage?Pro Plus6.0图像 分析软件检测阳性细胞的平均灰度值，灰度值越高，表达强度越弱。 1.3统计学处理 运用统计学