生物实验技术第六章 切片法的制作1.pptVIP

* 1、用氯仿蒸气凝固火棉胶(第3步)，有时火棉胶不凝固。 原因： (1)氯仿的量太少、蒸气不足。一般要求氯仿的量至少比火棉胶多1倍。 (2)盛火棉胶和组织块的容器的口太小，氯仿蒸气无法挥发进去。 (3)火棉胶太稀。 可以根据可能的原因采取相应的补救措施。 2、石蜡包埋后，石蜡与火棉胶之间分层。 原因： (1)火棉胶块在氯仿中透明的时间不够，组织块中的酒精、乙醚没有完全被替代出来。 (2)火棉胶内有水分。 (3)透蜡时间不够。 补救措施：将组织块放入苯中，使蜡溶掉，经苯洗涤后，用酒精与氯仿混合液(3：1)脱水，再经氯仿透明，浸蜡后，重新进行石蜡包埋。 * 2012.11.14 * APES 是一种新型玻片粘附剂,通过对玻璃表面起化学修饰作用，改变其表面的化学物理特性，使组织切片牢固地贴于玻璃片上。上述处理的玻片可以保存半年左右。 * 不同材料冰冻切片温度: 肌肉须用异戊烷冰冻,否则会形成冰晶,除肌肉以外的组织皆可用冰冻切片,-20~-25℃,一般最适-22℃.肝较软，可提高到-15℃，脑组织-18 ℃。硬组织要在更低温度下切片。 * 化学固定剂会使可溶性物质损失、扩散、移位、使酶失活等，改变组织的化学性质。冰冻切片法可以克服上述缺点。且可作石蜡切片。适用于水解酶、荧光技术、水溶性的同位素自显影技术的标本。 骤冷：使组织中所有的化学反应终止，不仅抑制自溶与腐败，也防止细胞内物质的弥散