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206 生 物 工 程 学 报 戴冠苹 等/代谢工程改造大肠杆菌生产辅酶Q10 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn February 25, 2015, 31(2): 206−219 DOI: 10.13345/j.cjb.140211 ©2015 Chin J Biotech, All rights reserved 工业生物技术 代谢工程改造大肠杆菌生产辅酶Q10 1,2,3 1,2,3 1,2,3 2,3 1 2,3 戴冠苹 ，苗良田 ，孙涛 ，李清艳 ，肖冬光 ，张学礼 1 天津科技大学生物工程学院，天津 300457 2 中国科学院天津工业生物技术研究所，天津 300308 3 中国科学院系统微生物工程重点实验室，天津 300308 戴冠苹, 苗良田, 孙涛, 等. 代谢工程改造大肠杆菌生产辅酶Q10. 生物工程学报, 2015, 31(2): 206–219. Dai GP, Miao LT, Sun T, et al. Production of coenzyme Q by metabolically engineered Escherichia coli . Chin J Biotech, 2015, 10 31(2): 206–219. 摘 要: 辅酶Q10 (CoQ 10) 是一种脂溶性抗氧化剂，具有提高人体免疫力、延缓衰老和增强人体活力等功能， 广泛应用于制药行业和化妆品行业。微生物发酵法能可持续性生产辅酶Q10 ，具有越来越多的商业价值。本研 究首先将来自类球红细菌的十聚异戊二烯焦磷酸合成酶基因 (dps) 整合到大肠杆菌ATCC 8739 染色体上，敲 除内源的八聚异戊二烯焦磷酸合成酶基因 (ispB) ，使内源的辅酶 Q8 合成途径被辅酶 Q10 合成途径取代，得到 稳定生产辅酶Q10 的菌株GD-14 ，其辅酶Q10 产量达0.68 mg/L ，单位细胞含量达0.54 mg/g DCW 。随后用多个 固定强度调控元件在染色体上对MEP 途径的关键基因 dxs 和 idi 基因以及 ubiCA 基因进行组合调控，将辅酶 Q10 单位细胞含量提高 2.46 倍 (从 0.54 到 1.87 mg/g)。进一步引入运动发酵单胞菌Zymomonas mobilis 的Glf 转运蛋白代替自身的磷酸烯醇式丙酮酸：碳水化合物磷酸转移酶系统 (PTS) ，使辅酶Q10 产量进一步提高 16%。 最后，对高产菌株GD-51 进行分批补料发酵，辅酶Q10 产量达433 mg/L ，单位细胞含量达11.7 mg/g DCW。 这是目前为止文献报道的大肠杆菌产辅酶Q10 最高菌株。 关键词: 辅酶 Q 10 ，同源重组，基因表达调控，大肠杆菌 Received: April 8, 2014; Accepted: May 12, 2014 Supported by: Tianjin Key Technology RD Program of Tianjin Municipal Science and Technology Commission (No. 12ZCZDSY14700), National High Technology Resea