生化实验03斐林试剂比色法测还原糖含量.pptVIP

实验03 植物组织中还原糖含量的测定 （斐林试剂比色法）; 脱色的程度与溶液中还原性糖含量成正比关系。在590nm波长下比色测定吸光度，根据吸光度的减少值查标准曲线，即可计算出所测样品中还原糖的含量。; 材料：新鲜植物叶片 仪器设备：分光光度计、分析天平、低速离心机、水浴锅等 试剂：1. 斐林试剂A液：40g CuSO4·5H2O溶解于蒸馏水定容至1.0L。2. 斐林试剂B液：200g酒石酸钾钠（KNaC4H4O6·5H2O）与150g NaOH溶于蒸馏水中，并定容至1.0L。 A、B两液分别贮存，使用前按1：1体积混合。 （已配好）; 0.1％葡萄糖标准液 烘干的纯葡萄糖100.00mg，加蒸馏水溶解定容至100ml 浓度：1.00 mg / ml （已配好）;三、实验方法与步骤;处理方法： 加斐林试剂后摇匀，加盖 沸水浴中15min，自然冷却 转入离心管，平衡后放入离心机！！ 离心：2500 r/min 5min 小心取出，取上清液测吸光值;标准曲线绘制： 以葡萄糖量(mg)为横座标，吸光度差值(ΔA590 ）为纵座标，在座标纸上绘制出标准曲线。; 3.0～4.0g样品 —→加水研磨成匀浆后转入50ml大试管 —→80℃水浴20min（间歇震荡） —→冷却后转入100ml容量瓶定容、过滤后得到待测溶液。 取待测液6.0ml进行测定（按制作标准曲线的步骤）。;W= g ；VT= 100 ml ; Vs= 6 ml ; A590 及ΔA590 填入工作曲线表 作式作曲线图 由工作曲线查得 样品的还原糖含量为C= ? mg ;样品还原糖的含量（%）＝ ;2种温度水浴处理，不可弄混 离心机使用注意安全。 思考：比较双缩脲试剂与斐林试剂的差异？ 思考：比较本实验与蛋白质测定实验中的化学原理差异？